维生素C对硫酸黏菌素所致PC12细胞损伤的拮抗作用

发布时间：2024-05-13 05:52

　　黏菌素(colistin)即多黏菌素E(polymyxin E),能有效治疗革兰氏阴性菌的感染,特别是对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆有特效。然而由于黏菌素存在肾毒性和神经毒性,二十世纪80年代其使用仅限于耐药革兰氏阴性菌感染的纤维囊性肺炎的治疗。近10年内,由于多重耐药革兰氏阴性细菌的泛滥而新的有效的抗生素的开发速度跟不上细菌强大的求生变异能力,多黏菌素重新进入人们的视野,其临床应用价值再次得到认识和评价。然而,其神经毒性仍然是亟待解决的问题。国外学者的研究发现维生素C能够有效拮抗硫酸黏菌素所诱发的肾毒性,而维生素C对硫酸黏菌素所致神经毒性的作用尚不清楚。本实验以人鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为对象,建立硫酸黏菌素神经损伤体外模型,观察维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤的拮抗作用,并对其保护作用的可能机制进行初步探讨,以期减小硫酸黏菌素毒性,为硫酸黏菌素和维生素C在临床上的联合应用提供理论依据和实践基础。 本实验首先分别以系列浓度硫酸黏菌素与PC12细胞作用不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetr...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 硫酸黏菌素概述
        1.1.1 硫酸黏菌素的理化性质
        1.1.2 硫酸黏菌素的抗菌机理
        1.1.3 硫酸粘菌素肾毒性
        1.1.4 硫酸黏菌素神经毒性
    1.2 细胞调亡
        1.2.1 细胞凋亡调控因子
        1.2.2 细胞凋亡途径
    1.3 氧化应激与细胞凋亡
    1.4 维生素C概述
        1.4.1 维生素C的理化性质
        1.4.2 维生素C的转运
        1.4.3 维生素C的生物学功效
    1.5 细胞大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)
    1.6 课题研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 仪器
        2.1.3 试剂
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤模型的建立
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 绘制不同密度细胞的生长曲线
        2.2.3 MTT比色法检测细胞活性
        2.2.4 硫酸黏菌素造模浓度及作用时间的筛选
    2.3 维生素C对硫酸黏菌素所致PC12细胞损伤的保护作用
        2.3.1 实验分组及药物处理
        2.3.2 倒置显微镜观察细胞形态
        2.3.3 细胞活力的测定
        2.3.4 乳酸脱氢酶(LDH)释放的测定
        2.3.5 细胞内活性氧(ROS)含量测定
        2.3.6 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
        2.3.7 谷胱甘肽(GSH)含量的检测
        2.3.8 DNA片段化的检测
        2.3.9 细胞色素c(Cyt-c)的测定
        2.3.10 Caspase-9和caspase-3表达水平的RT-PCR分析
    2.4 数据统计
3 结果
    3.1 硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤模型建立
        3.1.1 不同细胞密度下PC12细胞的生长曲线
        3.1.2 不同浓度硫酸黏菌素对PC12细胞活力的影响
    3.2 维生素C对硫酸黏菌素所致PC12细胞损伤的拮抗作用
        3.2.1 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞形态的影响
        3.2.2 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞活力的影响
        3.2.3 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响
        3.2.4 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞内活性氧(ROS)含量的影响
        3.2.5 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞内超氧化酶歧化酶(SOD)活性的影响
        3.2.6 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞内GSH含量的影响
        3.2.7 维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞DNA片段化的影响
        3.2.8 维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞内细胞色素C(Cyt-c)含量的影响
        3.2.9 维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平的影响
4 讨论
    4.1 硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤模型的评价
    4.2 维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤的拮抗作用
        4.2.1 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞活力的影响
        4.2.2 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞膜的影响
        4.2.3 维生素C对硫酸黏菌素损伤的PC12细胞内氧化水平的影响
    4.3 维生素C对硫酸黏菌素诱导PC12细胞损伤的拮抗作用的机制
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3972476