鸡大肠杆菌O 1 和O 78 血清型菌蜕的制备和应用的初步研究
发布时间：2024-05-15 00:23
由禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli, APEC)所引起的局部或者全身性感染的疾病统称为禽大肠杆菌病,其主要的临床症状有胚胎死亡、大肠杆菌性败血症、肿头综合征、脐炎卵黄囊感染、大肠杆菌性肉芽肿等,该病可以产生多种器官病变,主要病理变化有气囊病、脐炎、蜂窝织炎、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、全眼球炎等一系列病症。 本研究利用临床分离的O1、O78两种血清型鸡大肠杆菌分别制备了菌蜕疫苗,并接种雏鸡进行了免疫保护试验。本研究取得的结果如下： 1.鸡大肠杆菌O1、O78菌蜕的制备 用PCR扩增噬菌体裂解蛋白的基因E,将其连接到pMD-18T载体,测序发现有一个碱基发生了突变。进一步对突变基因进行了定点突变,经测序正确后与温控表达载体pBV220连接,构建了溶菌表达质粒pBV220-Em,并对临床分离的O1、O78两种血清型鸡大肠杆菌菌株分别进行电击转化,获得了重组大肠杆菌01-E和大肠杆菌O78-E。将两个重组菌株分别在29℃增菌培养,42℃诱导溶菌,制备了O1、O78两种血清型鸡大肠杆菌的菌蜕。结果显示溶菌灭活效率约为95%,一般在1h左右开始溶...
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 鸡大肠杆菌病研究进展
1.1 鸡大肠杆菌流行病学特点
1.2 鸡大肠杆菌血清型
1.3 鸡大肠杆菌毒力因子研究进展
2 鸡大肠杆菌临床症状及诊断方法研究进展
2.1 临床症状
2.2 鸡大肠杆菌病的诊断及分离与鉴定
3 鸡大肠杆菌病的防治研究进展
3.1 鸡大肠杆菌病的药物防治
3.2 鸡大肠杆菌病的疫苗防治
4 菌蜕疫苗的研究进展
4.1 菌蜕疫苗的原理及制备
4.2 细菌菌蜕疫苗研究进展
4.3 菌蜕疫苗的应用
5 本研究的目的、意义和主要内容
5.1 本研究的目的和意义
5.2 本研究的主要内容
第二章 鸡大肠杆菌O1和O78两种血清型重组菌株的构建及溶菌动力学实验
1 目的和意义
2 材料
2.1 菌株和质粒
2.2 主要分子生物学及生化试剂
2.3 主要溶液的配制
2.4 主要仪器设备
3 试验方法
3.1 鸡大肠杆菌分离株的复苏
3.2 溶菌表达质粒的构建
3.3 E基因的定点突变
3.4 构建重组表达质粒pBV220-Em
3.5 鸡大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
3.6 电击转化重组质粒的筛选和鉴定
3.7 重组大肠杆菌的溶菌动力学实验
4 结果与分析
4.1 E基因的PCR扩增结果
4.2 克隆pMD18T-E载体鉴定
4.3 重组质粒测序
4.4 质粒pMD18T-E基因定点突变
4.5 质粒pMD18T-Em测序分析
4.6 构建的重组表达质粒pBV220-Em鉴定
4.7 电转化重组子的鉴定
4.8 重组大肠杆菌的溶菌动力学实验
5 讨论
第三章 鸡大肠杆菌交叉免疫保护试验
1 目的和意义
2 材料
2.1 菌株及实验动物
2.2 主要分子生物学及生化试剂
2.3 主要溶液的配制
2.4 主要仪器设备
3 试验方法
3.1 大肠杆菌复苏及活菌数测定
3.2 鸡大肠杆菌半数致死量的测定
3.3 鸡大肠杆菌O1、O78菌株疫苗的制备
3.4 鸡大肠杆菌疫苗的安全性评价
3.5 鸡大肠杆菌疫苗免疫保护试验
3.6 鸡大肠杆菌的攻毒后免疫保护率测定
3.7 采血并测定血清抗体效价
4 结果与分析
4.1 鸡大肠杆菌的复苏及活菌计数测定
4.2 鸡大肠杆菌的半数致死量测定
4.3 鸡大肠杆菌O1-E和O78-E菌株疫苗的制备
4.4 鸡大肠杆菌疫苗的安全性评价
4.5 鸡大肠杆菌疫苗的免疫保护效果
4.6 采血并测定血清抗体效价
5 讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3973630
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 鸡大肠杆菌病研究进展
1.1 鸡大肠杆菌流行病学特点
1.2 鸡大肠杆菌血清型
1.3 鸡大肠杆菌毒力因子研究进展
2 鸡大肠杆菌临床症状及诊断方法研究进展
2.1 临床症状
2.2 鸡大肠杆菌病的诊断及分离与鉴定
3 鸡大肠杆菌病的防治研究进展
3.1 鸡大肠杆菌病的药物防治
3.2 鸡大肠杆菌病的疫苗防治
4 菌蜕疫苗的研究进展
4.1 菌蜕疫苗的原理及制备
4.2 细菌菌蜕疫苗研究进展
4.3 菌蜕疫苗的应用
5 本研究的目的、意义和主要内容
5.1 本研究的目的和意义
5.2 本研究的主要内容
第二章 鸡大肠杆菌O1和O78两种血清型重组菌株的构建及溶菌动力学实验
1 目的和意义
2 材料
2.1 菌株和质粒
2.2 主要分子生物学及生化试剂
2.3 主要溶液的配制
2.4 主要仪器设备
3 试验方法
3.1 鸡大肠杆菌分离株的复苏
3.2 溶菌表达质粒的构建
3.3 E基因的定点突变
3.4 构建重组表达质粒pBV220-Em
3.5 鸡大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
3.6 电击转化重组质粒的筛选和鉴定
3.7 重组大肠杆菌的溶菌动力学实验
4 结果与分析
4.1 E基因的PCR扩增结果
4.2 克隆pMD18T-E载体鉴定
4.3 重组质粒测序
4.4 质粒pMD18T-E基因定点突变
4.5 质粒pMD18T-Em测序分析
4.6 构建的重组表达质粒pBV220-Em鉴定
4.7 电转化重组子的鉴定
4.8 重组大肠杆菌的溶菌动力学实验
5 讨论
第三章 鸡大肠杆菌交叉免疫保护试验
1 目的和意义
2 材料
2.1 菌株及实验动物
2.2 主要分子生物学及生化试剂
2.3 主要溶液的配制
2.4 主要仪器设备
3 试验方法
3.1 大肠杆菌复苏及活菌数测定
3.2 鸡大肠杆菌半数致死量的测定
3.3 鸡大肠杆菌O1、O78菌株疫苗的制备
3.4 鸡大肠杆菌疫苗的安全性评价
3.5 鸡大肠杆菌疫苗免疫保护试验
3.6 鸡大肠杆菌的攻毒后免疫保护率测定
3.7 采血并测定血清抗体效价
4 结果与分析
4.1 鸡大肠杆菌的复苏及活菌计数测定
4.2 鸡大肠杆菌的半数致死量测定
4.3 鸡大肠杆菌O1-E和O78-E菌株疫苗的制备
4.4 鸡大肠杆菌疫苗的安全性评价
4.5 鸡大肠杆菌疫苗的免疫保护效果
4.6 采血并测定血清抗体效价
5 讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3973630
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