产脂肪酶芽孢杆菌的分离及在鸡饲喂上的应用

发布时间：2024-05-19 04:19

　　本试验从富含油脂的土壤中筛选到一株产脂肪酶的芽孢杆菌菌株3EA1-1，经紫外诱变其酶活力达到50.5U/mL，命名为EA-300-A。对该菌株进行16S rDNA序列分析，并结合生理生化和菌落形态特征，最后鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。 对上述菌株进行体外模拟人工胃肠道的耐受性研究。研究发现：EA-300-A菌株对人工胃液、肠液和胆酸盐培养基的耐受性比较强，同时通过安全性实验，已经基本证明它对动物没有毒害作用。 上述研究表明，菌株Bacillus subtilis EA-300-A具有较高的酶活性，可以耐受人工胃肠液，并且生物安全，表明该菌株具有进一步大规模应用的潜力。为了便于后期菌剂生产，本试验对菌株进行了产芽孢条件优化，单因素试验和正交试验结果表明，EA-300-A菌株最适的产芽孢发酵条件为：2.0%玉米粉，1.0%黄豆饼粉，0.3%CaCl2·2H2O，Na2HPO4·12H2O0.4%，NaH2PO4·2H2O0.2%，初始pH8.0，种龄12h，接种量10%，装量50mL/250mL。 为了验证EA-300-A菌剂在饲喂上的效果，选取蛋公鸡为研究对象...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 脂肪酶在饲料中的应用
        1.1.1 饲料中添加脂肪酶的作用
        1.1.2 饲料中添加脂肪酶的研究
    1.2 市售脂肪酶的不足
    1.3 微生物脂肪酶的种类及选育方法
        1.3.1 产脂肪酶微生物的种类
        1.3.2 产脂肪酶微生物菌株的筛选方法
        1.3.3 直接饲喂产脂肪酶芽孢杆菌的优点
    1.4 本试验的目的、意义及主要内容
        1.4.1 本试验的目的意义
        1.4.2 本试验的主要内容
第二章 产脂肪酶芽孢杆菌的分离筛选及鉴定
    2.1 试验材料
        2.1.1 样品
        2.1.2 培养基
        2.1.3 试剂
        2.1.4 仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 菌株的初筛
        2.2.2 产酶菌株的复筛
        2.2.3 酶活力的测定
        2.2.4 产酶菌株的鉴定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 产脂肪酶菌株的初筛
        2.3.2 产脂肪酶菌株的复筛
        2.3.3 酶活测定结果
        2.3.4 形态学测定
        2.3.5 分子生物学测定
        2.3.6 生理生化鉴定
    2.4 讨论
第三章 产脂肪酶芽孢杆菌的紫外诱变
    3.1 试验材料
        3.1.1 供试菌株
        3.1.2 培养基
        3.1.3 主要仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 生长曲线的测定
            3.2.1.1 种子液的制备
            3.2.1.2 标记编号
            3.2.1.3 转接培养
            3.2.1.4 生长曲线的制作
        3.2.2 菌株 3EA1-1 的紫外诱变
            3.2.2.1 紫外诱变处理
            3.2.2.2 初筛
            3.2.2.3 复筛
            3.2.2.4 酶活力的测定
        3.2.3 遗传稳定性测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 3EA1-1 的对数生长曲线
        3.3.2 紫外诱变初筛结果
        3.3.3 紫外诱变复筛结果
        3.3.4 菌株 3EA1-1（300-A）遗传稳定性结果
    3.4 讨论
第四章 诱变菌株 EA-300-A 体外特性评价
    4.1 试验材料
        4.1.1 菌种
        4.1.2 培养基及试剂
        4.1.3 仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 EA-300-A 菌株对人工胃液的耐受性
        4.2.2 EA-300-A 菌株对人工肠液的耐受性
        4.2.3 EA-300-A 菌株对胆酸盐的耐受性
        4.2.4 安全性实验
    4.3 结果与分析
        4.3.1 EA-300-A 菌株对人工胃液的耐受性
        4.3.2 EA-300-A 菌株对人工肠液的耐受性
        4.3.3 EA-300-A 菌株对胆酸盐的耐受性
        4.3.4 安全性实验
    4.4 讨论
第五章 菌株 EA-300-A 产芽孢条件优化
    5.1 试验材料
        5.1.1 供试菌株
        5.1.2 培养基
        5.1.3 试剂
        5.1.4 试验仪器
    5.2 试验方法
        5.2.1 种子培养
        5.2.2 发酵培养
        5.2.3 正交试验
        5.2.4 芽孢产率测定
    5.3 结果与分析
        5.3.1 不同碳源对菌株 EA-300-A 发酵产芽孢的影响
        5.3.2 氮源对菌株 EA-300-A 发酵产芽孢的影响
        5.3.3 无机盐对菌株 EA-300-A 发酵产芽孢的影响
        5.3.4 培养基成分正交试验
        5.3.5 培养条件正交试验
    5.4 讨论
第六章 菌剂 EA-300-A 对鸡饲喂效果试验
    6.1 试验材料
        6.1.1 试验用鸡
        6.1.2 产酶芽孢杆菌制剂
        6.1.3 试验饲粮
        6.1.4 试验仪器
        6.1.5 试验培养基
    6.2 试验方法
        6.2.1 试验设计与动物饲养管理
        6.2.2 待测指标及测定方法
            6.2.2.1 产酶菌剂对鸡生产性能的影响
            6.2.2.2 产酶菌剂菌剂对鸡十二指肠中脂肪酶活性的影响
            6.2.2.3 产酶菌剂菌剂对鸡营养物质代谢的影响
            6.2.2.4 产酶菌剂对鸡盲肠内菌群的影响
        6.2.3 数据处理
    6.3 结果与分析
        6.3.1 产酶菌剂对鸡生产性能的影响
            6.3.1.1 产酶菌剂对鸡腹泻和因病死亡的影响
            6.3.1.2 平均日增重
            6.3.1.3 平均日采食量
            6.3.1.4 料重比
        6.3.2 产酶菌剂对十二指肠内脂肪酶活力的影响
        6.3.3 产酶菌剂对粪便中物质残留的影响
        6.3.4 产酶菌剂对盲肠中菌群的影响
    6.4 讨论
第七章 结论
参考文献
在读期间发表论文
作者简介
致谢



本文编号：3977591