猪流行性腹泻病毒在稳定表达猪ACE2基因的IPEC-J2细胞中的增殖研究

发布时间：2024-05-21 01:48

　　为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J2细胞后,经潮霉素B筛选和单克隆细胞培养,获得IPEC-J2-ACE2细胞系。通过荧光定量RT-PCR和Western blot对单克隆细胞中ACE2基因的mRNA转录和蛋白表达水平进行鉴定。以PEDV-WH株感染IPEC-J2-ACE2细胞,通过间接免疫荧光试验和荧光定量RT-PCR检测发现,PEDV-WH株在IPEC-J2-ACE2细胞中比在IPEC-J2细胞中的增殖能力高。

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【部分图文】：

图2重组质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP的双酶切鉴定

分别对pCMV3-porcine-ACE2-GFP质粒进行KpnⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定猪源ACE2基因，BamHⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定GFP基因，PCR电泳结果显示，插入的目的片段与预期大小一致（猪源ACE2基因2416bp,GFP基因714bp），送上海生工生物工程技术服务....

图3IPEC-J2-ACE2细胞的筛选

分别提取IPEC-J2-ACE2细胞和IPEC-J2细胞的总RNA，然后进行相对荧光定量RT-PCR检测。结果显示，与IPEC-J2细胞组相比，IPEC-J2-ACE2细胞组猪源ACE2基因的mRNA水平明显升高（图4）。将IPEC-J2-ACE2细胞和IPEC-J2细胞的蛋白样....

图4IPEC-J2-ACE2细胞中ACE2的mRNA表达

图3IPEC-J2-ACE2细胞的筛选图5IPEC-J2-ACE2细胞中ACE2的蛋白表达

图5IPEC-J2-ACE2细胞中ACE2的蛋白表达

图4IPEC-J2-ACE2细胞中ACE2的mRNA表达2.5PEDV-WH毒株在IPEC-J2-ACE2细胞中的增殖

本文编号：3979430