陆川猪PDK4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

发布时间：2024-05-28 03:02

　　试验旨在了解陆川猪丙酮酸脱氢激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)基因CDS区序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建PDK4基因的真核表达载体,分析PDK4基因在陆川猪不同组织中的表达情况,以期为阐明PDK4基因在陆川猪生长发育过程中的分子机制奠定基础。采用RT-PCR技术扩增陆川猪皮下脂肪PDK4基因CDS区,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能,并利用常规分子克隆技术将其插入真核表达载体中获得pEGFP-N1-PDK4,用脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞并观察荧光,用实时荧光定量PCR检测PDK4基因mRNA在陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪中的表达情况。结果显示,陆川猪PDK4基因CDS区全长1 224 bp,编码407个氨基酸,与NCBI上公布的野猪PDK4基因CDS区同源性达99.8%。对陆川猪PDK4基因所编码的蛋白进行生物信息学分析发现,其分子质量约为46.144 ku,原子总数为6 509个,理论等电点(pI)为7.21,带正电荷和负电荷的氨基酸数均为42个。PDK4蛋白可能有2个N-糖基化位点...

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【部分图文】：

图3PDK4基因系统进化树

图2PDK4基因同源性比对2.2生物信息学分析

图4陆川猪PDK4蛋白疏水性分析

利用TMHMMServerv2.0软件对PDK4蛋白进行跨膜结构分析,结果显示,该蛋白不存在跨膜结构(图5);利用Signal5.1软件对该蛋白进行信号肽预测,结果显示无信号肽,说明PDK4蛋白为非分泌蛋白(图6)。图5陆川猪PDK4蛋白跨膜结构分析

图5陆川猪PDK4蛋白跨膜结构分析

图4陆川猪PDK4蛋白疏水性分析图6陆川猪PDK4蛋白信号肽预测

图6陆川猪PDK4蛋白信号肽预测

图5陆川猪PDK4蛋白跨膜结构分析2.2.4磷酸化位点和N-糖基化位点

本文编号：3983401