利用CRISPR/Cas9技术构建Myostatin基因敲除兔模型

发布时间：2024-06-15 02:56

　　肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN),是TGF-β超家族成员之一,其主要功能是负向调控骨骼肌生长发育。研究报道,MSTN自然突变的牛、羊具有肌肉增加、饲料转化率高、瘦肉率高等特点,被称为“双肌牛、双肌羊”。其为进一步研究双肌性状的组织形态学及遗传学机制提供理想的动物模型。迄今,虽然已成功构建了MSTN基因敲除小鼠、羊、猪及狗,且均表现出理想的双肌表型,但还没有关于MSTN基因敲除兔的相关报道。兔子是生物医学研究中一种理想的基因打靶动物模型。与小鼠相比,兔子和人类在生理学和解剖学上有更多的相似之处。而与猪、猴相比,兔子发情期和妊娠期短,产仔数多,饲养消费低。因此,本实验利用CRISPR/Cas9技术制备MSTN基因敲除兔,其不仅可为研究MSTN对肌肉的调控作用提供合适的动物模型,还可用以提高兔肉质,满足日益增长的肉类消费需求。首先,本实验在兔MSTN基因的第一外显子上设计了两个g RNA,并构建有效的MSTN基因打靶载体。通过显微注射和胚胎移植法,成功构建了MSTN基因敲除兔。结果表明,MSTN基因敲除兔具有典型的双肌表型,且均无脱靶发生。此外,子代MSTN基因敲除兔中也出...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第1章 基因编辑技术的研究概述
        1.1 基因编辑的发展历史
        1.2 基因编辑技术的应用及前景
            1.2.1 基因编辑技术在基因工程领域的应用
            1.2.2 基因编辑技术在生物医学领域的应用
    第2章 CRISPR/CAS9的研究概述
        2.1 CRISPR/Cas9系统的结构与作用机制
            2.1.1 CRISPR/Cas9系统的结构组成
            2.1.2 CRISPR/Cas9系统的作用机制
        2.2 CRISPR/Cas9技术存在的问题
        2.3 CRISPR/Cas9技术的应用及前景
            2.3.1 大片段敲除
            2.3.2 外源基因的插入以及基因修复治疗
            2.3.3 调控内源基因的表达或甲基化水平
    第3章 MSTN基因的研究概述
        3.1 MSTN基因的结构与调控机制
        3.2 MSTN基因敲除动物的研究进展
第二篇 研究内容
    第1章 胚胎水平上对CRISPR/CAS9敲除效率的验证
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 实验结果
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 MSTN基因敲除兔的建立
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 F1代双肌兔的获得及鉴定
        3.1 实验材料
        3.2 实验方法
        3.3 实验结果
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他成果
致谢



本文编号：3994818