山东省猪瘟病毒流行株E2基因多态性分析和E2基因真核表达载体的构建及免疫原性鉴定

发布时间：2024-06-15 03:46

　　猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病,以高稽留热、皮肤和黏膜广泛出血为临床特征,死亡率极高。猪瘟的流行给全球养猪业造成了巨大的经济损失,严重影响了生猪及相关产品的进出口贸易。我国是世界上猪瘟的主要流行地区之一,以隐性感染和散发流行为主要特点,流行情况复杂。开展系统的猪瘟病毒流行病学调查,掌握猪瘟流行毒株变化规律和变异程度,研制新型猪瘟疫苗,对我国猪瘟防控工作有着极其重要的意义。具体研究内容和结果分为以下三部分： 1.山东省猪瘟病毒流行毒株的分离和鉴定 本研究以2011年至2012年在山东省规模化猪场采集的656份样品为研究对象,通过RT-PCR技术检测样品中是否含有猪瘟病毒,结果136份样品中检出猪瘟病毒,阳性率为20.66%。该结果说明山东省内规模化猪场普遍存在猪瘟病毒感染。将检出的阳性样品接种PK-15细胞,分离病毒,并通过RT-PCR和real-time PCR进行鉴定。 2.山东省猪瘟流行毒株E2基因多态性研究 为了进一步了解山东省内猪瘟的流行特点,通过RT-PCR手段获得分离毒株的E2基因序列,然后将序列与参考毒株的E2基因序列进行比对,分析流行毒株的基因多样性。结果共...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 猪瘟概述
        1 CSFV
            1.1 CSFV的基本生物学特性
            1.2 CSFV的分子生物学特性
        2 CSF流行现状
            2.1 国际流行现状
            2.2 我国CSF流行现状
            2.3 CSFV的遗传进化
        3 CSF的临床症状与病理变化
        4 CSF诊断技术
            4.1 病原学诊断技术
            4.2 血清学诊断技术
            4.3 分子生物学诊断
        5 CSF疫苗研究现状
            5.1 传统疫苗
            5.2 亚单位疫苗
            5.3 重组活载体疫苗
            5.4 基因缺失疫苗
            5.5 核酸疫苗
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 山东省猪瘟病毒流行毒株的分离和鉴定
        摘要
        1 材料
            1.1 样品
            1.2 试剂
            1.3 细胞及培养基
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 样品处理
            2.2 病毒核酸的提取
            2.3 病毒核酸的检测
            2.4 PCR产物检测
            2.5 病毒分离培养
            2.6 病毒的鉴定
        3 结果
            3.1 病毒核酸的检测
            3.2 细胞毒的鉴定
        4 分析和讨论
        ABSTRACT
        参考文献
    第二章 山东省猪瘟流行毒株E2基因多态性研究
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株、菌株和质粒
            1.2 主要材料与试剂
            1.3 引物
        2 方法
            2.1 病毒RNA提取
            2.2 E2基例的扩增
            2.3 E2基因的回收和纯化
            2.4 PCR产物与克隆载体的连接
            2.5 连接产物转化感受态细胞
            2.6 质粒DNA的提取
            2.7 重组质粒的PCR鉴定
            2.8 E2基因序列的测定和分析
        3 结果
            3.1 CSFV E2基因的克隆及鉴定
            3.2 CSFV E2基因同源性分析
        4 讨论和分析
            4.1 核苷酸和氨基酸同源性分析
            4.2 氨基酸位点变化分析
            4.3 进化树分析
        ABSTRACT
        参考文献
    第三章 猪瘟病毒E2基因真核表达载体的构建及免疫原性鉴定
        摘要
        1 材料
            1.1 质粒、血清、细胞和菌株
            1.2 试剂
            1.3 试验动物
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 E2基因的扩增与回收
            2.2 E2基因的连接与转化
            2.3 真核表达载体的构建与鉴定
            2.4 重组质粒在PK-15细胞中的表达和鉴定
            2.5 小鼠免疫
            2.6 免疫原性鉴定
            2.7 数据分析
        3 结果
            3.1 重组质粒鉴定结果
            3.2 细胞转染结果
            3.3 动物实验结果
        4 讨论
        ABSTRACT
        参考文献
全文结论
附录
致谢



本文编号：3994878