核转录因子-κB C-Rel亚基克隆及C-Rel/P65/P50对猪伪狂犬病毒在BHK21细胞上增殖的影响

发布时间：2024-06-29 23:08

　　细胞核因子-κB (Nuclear factor κappa B)是一种较特殊的转录调节因子,普遍存在于真核细胞内,对宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡起到关键的调节作用。细胞核转录因子-κB可以通过调控相关靶基因的转录与表达,参与机体的多种生理活动,当机体感染细菌或病毒等致病因素,其信号通路将在一系列酶的作用下被激活,参与宿主的免疫应答,它的异常活化可能是PRV导致免疫抑制的重要原因。为获得猪NF-κB C-Rel亚基序列特性,对PRV感染导致的免疫抑制与NF-κB表达异常的关联性进行研究,本试验通过NCBI GeneBank中猪核转录因子-κB C-Rel亚基序列(XM 003125115)设计特异性引物,对NF-κB C-Rel全序列进行克隆、序列鉴定及生物信息学分析；对PRV感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响进行分析；并构建NF-κB C-Rel真核表达载体,对NF-κB C-Rel亚基真核表达产物对PRV复制的影响进行探讨,结果如下：1.猪核转录因子NF-κB C-Rel亚基的克隆及序列鉴定本实验采用RT-PCR方法从猪外周血淋巴细胞中扩增到NF-κB C-R...

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中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 文章综述、研究目的及意义
    1 核转录因子-κB概述
        1.1 核转录因子-κB成员及功能
        1.2 核转录因子-κB信号通路的激活途径
        1.3 核转录因子-κB的调节作用
        1.4 核转录因子κB的生物学功能
    2 PRV概述
        2.1 病原
        2.2 培养特性
        2.3 流行病学
        2.4 临床症状
        2.5 NF-κB在PRV的感染机制中的作用研究
    3 研究目的及意义
第二部分 试验研究
    第一章 猪NF-κ B C-Rel基因的克隆及序列分析
        1 材料与方法
            1.1 试验材料与仪器
            1.2 试验方法
        2 结果
            2.1 猪C-Rel亚基的克隆及鉴定
            2.2 猪C-Rel亚基的生物信息学分析
        3 讨论
    第二章 PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响
        1 试验材料与方法
            1.1 细胞及毒株
            1.2 试验材料与仪器
            1.3 试验方法
        2 结果
            2.1 普通PCR扩增及鉴定
            2.2 反应体系的优化
            2.4 灵敏度检测
            2.5 标准曲线的建立
            2.6 C-Rel基因不同时期转录时相分析
        3 讨论
    第三章 猪NF-κB C-Rel亚基真核表达载体的构建及C-Rel/P50/P65转染BHK
        1 材料与方法
            1.1 试验材料及仪器
            1.2 试验方法
        2 结果
            2.1 猪C-Rel亚基真核表达序列的扩增与鉴定
            2.2 猪C-Rel亚基真核表达载体的构建及鉴定
            2.3 猪NF-κB C-Rel/P50/P65真核表达载体转染BHK21细胞的表达
            2.4 猪NF-κB C-Rel/p65/p50真核表达载体转染BHK21细胞CPE的影响
            2.5 PRV gE基因荧光定量检测方法的建立
            2.6 PRV一步生长曲线
        3 结论
第三部分 结论
第四部分 参考文献
致谢
攻读硕士学位之间发表的学术论文



本文编号：3998027