丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶的克隆表达及其免疫学特性的研究

发布时间：2024-07-06 09:27

　　由丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma. Mycoides subsp. capri. Mmc)引起的山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia, CCPP)是山羊特有的一种接触性传染病。丝状支原体山羊亚种属于丝状支原体簇,丝状支原体簇共有六个成员,PG3标准株是在1951年由Chu和Berieidege两人分离得到。山羊传染性胸膜肺炎的主要临床症状有纤维素性肺炎、高热和胸膜炎等。在我国很多地区发病率较高,给很多地区的山羊饲养业造成了较大的经济损失和潜在威胁。乳酸脱氢酶(LDH)又称为NAD+氧化酶,是生物体内氧化还原反应过程中重要的催化剂之一,也是糖代谢酵解途径的关键酶之一。LDH广泛存在于动物组织和各种微生物细胞内,在高等动物体内只存在一种乳酸脱氢酶L-乳酸脱氢酶,在细菌中两种乳酸脱氢酶都存在。关于丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶的研究尚未见报道。本实验对丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶进行克隆表达,空间结构预测,并对其免疫学特性进行了初步研究,为寻找该病原的靶位点以及进一步研制亚单位疫苗或诊断抗原等后续研究提供理论基础。 1.LDH蛋白的...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 支原体概述
    1.2 支原体的致病机制
    1.3 支原体功能蛋白
    1.4 山羊传染性胸膜肺炎
        1.4.1 山羊传染性胸膜肺炎病原
        1.4.2 流行病学
        1.4.3 山羊传染性胸膜肺炎的诊断与防治
    1.5 乳酸脱氢酶概述
    1.6 乳酸脱氢酶酶学性质
第2章 引言
    2.1 研究背景与意义
    2.2 技术路线
第3章 LDH基因的克隆与表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株及质粒
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 山羊支原体的复壮
        3.2.2 山羊支原体丝状亚种标准株PG3基因组DNA的制备
        3.2.3 引物设计合成
        3.2.4 第一个点突变
        3.2.5 第二、三个点的突变
        3.2.6 pGEX-6P-2-LDH在E.coli XL-1中的表达
        3.2.7 重组蛋白LDH的酶切纯化
        3.2.8 LDH的大规模制备与纯化
    3.3 实验结果
        3.3.1 LDH的PCR结果
        3.3.2 重组质粒pGEX-6P-2-LDH酶切鉴定
        3.3.3 序列测定
        3.3.4 LDH蛋白的纯化与表达
    3.4 讨论
第4章 生物信息学分析
    4.1 材料来源
    4.2 方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 LDH的理化性质
        4.3.2 LDH信号肽预测
        4.3.3 LDH跨膜区预测
        4.3.4 LDH二级结构预测
        4.3.5 蛋白质的空间结构
    4.4 讨论
第5章 免疫学特性
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要试剂
        5.1.2 主要仪器设备
        5.1.3 主要溶液及试剂配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 重组蛋白LDH兔抗血清的制备
        5.2.2 免疫印迹试验(Western blotting)
    5.3 实验结果
        5.3.1 LDH蛋白的免疫效果检测
    5.4 讨论
第6章 . 论文总结
    6.1 丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶的克隆表达及纯化
    6.2 丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶的免疫原性
    6.3 丝状支原体山羊亚种乳酸脱氢酶生物信息学分析
参考文献
附表
致谢



本文编号：4002392