川牛膝多糖对小鼠免疫反应的影响及机理研究
发布时间：2024-10-04 19:53
传染病特别是病毒性传染病,在全世界范围内对畜牧业造成严重损失,接种疫苗是目前控制传染病最有效的手段。然而,养殖场虽然按免疫程序进行了严格的疫苗接种,但在很多情况下动物仍然难以产生有效的免疫应答,至使很多传染病不能完全被控制。如注射疫苗的同时,配合应用适当的免疫增强剂可以辅助疫苗产生较好的免疫应答,提高其免疫效力,从而提高疫苗免疫的效果。应用免疫增强剂成为目前提高疫苗免疫效果的重要手段之一。现有的研究表明,中药及其有效成分能够显著提高疫苗的免疫效果,很多中药及其主要成分作为疫苗的免疫增强剂已开始在动物及人的临床上使用。四川省是我国最大的中药产区,四川道地药材一向以其品质优而著称。本论文在现有文献的基础上选取10种具有免疫调节作用的四川产道地药材,包括川牛膝,川杜仲,川明参,川麦冬,川续断,川丹参,川泽泻,川芎,川白芷,川佛手；从中筛选出具有免疫增强作用的药材,并进一步研究其水提物的主要成分对疫苗免疫反应的影响及分子机理,为进一步从川产道地药材中开发免疫增强剂提供科学依据。本文具体开展的研究和取得的结果如下： 1.十种川产道地药材水提物对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响 ...
【文章页数】：171 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 研究背景
第一节 川产道地药材免疫调节作用的研究进展
1 川牛膝的免疫调节作用
1.1 对体液免疫的影响
1.2 对细胞免疫的影响
1.3 对红细胞免疫的影响
1.4 对机体免疫低下的保护作用
2 杜仲的免疫调节作用
2.1 对体液免疫的影响
2.2 对细胞免疫的影响
2.3 对免疫器官的影响
3 川明参的免疫调节作用
3.1 对体液免疫的影响
3.2 对细胞免疫的影响
4 川麦冬免疫调节作用
4.1 对细胞免疫的影响
4.2 对免疫器官的影响
4.3 对免疫低下的保护作用
4.4 对过敏反应的影响
5 川续断免疫调节作用
5.1 对细胞免疫的影响
5.2 对免疫低下的保护作用
6 丹参的免疫调节作用
6.1 对细胞免疫的影响
6.2 对红细胞免疫的影响
6.3 对免疫器官的影响
6.4 对细胞因子的影响
6.5 对机体免疫低下的保护作用
7 川泽泻的免疫调作用
8 川芎的免疫调节作用
9 川白芷免疫调节作用
10 川佛手的免疫调节作用
第二节 中药多糖免疫调节作用的研究进展
1 中药多糖的免疫调节作用
1.1 对体液免疫的影响
1.2 对细胞免疫的影响
1.3 对细胞因子的影响
1.4 对红细胞免疫的影响
1.5 对细胞毒淋巴细胞(NK,CTL)杀伤活性的影响
1.6 对单核吞噬细胞系统的影响
2 中药多糖免疫调节作用的途径
2.1 通过促进树突细胞成熟和迁移途径激活机体免疫反应
2.1.1 树突细胞的来源及其在免疫反应中的作用
2.1.2 树突细胞的迁移在免疫反应中的作用
2.1.3 树突细胞的成熟在免疫反应中的作用
2.2 通过Toll样受体通路激活免疫反应
2.2.1 Toll样受体在机体免疫反应中的作用
2.2.2 免疫增强剂对Toll样受体的调节
2.3 通过CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞发挥调节作用
2.3.1 调节性Treg细胞在机体免疫反应中的作用
2.3.2 免疫增强剂对Treg细胞的调节作用
第三节 中药川牛膝的研究进展
1 川牛膝的本草考证
2 栽培、加工炮制与品质研究
3 药理作用
3.1 对血液循环系统的影响
3.2 对机体免疫功能的影响
3.3 对泌尿生殖系统的影响
3.4 抗肿瘤作用
3.5 抗病毒作用
3.6 抗衰老作用
3.7 抗炎作用
3.8 补益作用
4 临床应用概况
第四节 立题依据、研究内容、技术路线与方法
1 立题依据
2 研究内容、技术路线与方法
2.1 研究内容
2.2 技术路线
2.3 方法
参考文献
第二章 十种川产道地药材水提物对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 试验用中药
1.1.2 免疫试剂
1.1.3 ELISA主要试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 中药水提物的制备
2.2 动物分组和免疫程序
2.3 血样采集
2.4 OVA特异性IgG水平的检测
2.5 OVA特异性IgG亚类水平的检测
2.6 统计学分析
3 结果
3.1 十种中药水提物对血清中OVA特异性IgG抗体水平的影响
3.2 三种中药水提物对血清中OVA特异性抗体亚类IgG1、IgG2a、IgG2b水平的影响
4 讨论
5 小结
第三章 不同剂量川牛膝水提物对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 中药
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 细胞因子检测所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 川牛膝水提物的制备
2.2 动物分组和免疫程序
2.3 血样采集
2.4 内毒素检测
2.5 OVA特异性IgG水平的检测
2.6 OVA特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.7 T淋巴细胞增殖能力检测
2.8 淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.9 统计学分析
3 结果
3.1 RC对血清OVA特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RC对血清OVA特异性抗体亚类IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影响
3.3 RC对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RC对脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量的影响
3.5 RC对小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RC对OVA受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RC对OVA受免小鼠细胞因子的影响
4.3 RC对OVA受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.4 RC对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第四章 川牛膝多糖体外免疫活性研究
1 材料
1.1 主要试剂与药品
1.1.1 川牛膝多糖
1.1.2 测定淋巴细胞最大安全浓度所用试剂
1.1.3 淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.4 细胞因子检测所用试剂
1.1.5 NK细胞杀伤试验染色主要试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 对脾淋巴细胞最大安全浓度测定
2.2 淋巴细胞增殖能力检测
2.3 脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.4 NK细胞杀伤活力检测
2.4.1 效应细胞的制备
2.4.2 K562细胞的复苏及培养
2.4.3 细胞的传代与培养
2.4.4 细胞计数和细胞活力
2.4.5 靶细胞(K562)染色
2.4.6 NK细胞杀伤活力检测
2.5 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对脾淋巴细胞最大无毒浓度的测定
3.2 RCPS体外对淋巴细胞增殖的影响
3.3 RCPS体外对脾淋巴细胞分泌细胞因子能力的影响
3.4 RCPS在体外对NK细胞杀伤活性的影响
4 讨论
4.1 RCPS在体外对淋巴细胞的毒性
4.2 RCPS在体外对淋巴细胞增值能力的影响
4.3 RCPS在体外对淋巴细胞分泌细胞因子的影响
4.4 RCPS在体外对NK细胞杀伤活性的影响
5 小结
参考文献
第五章 川牛膝多糖对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响及机理研究
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 川牛膝多糖
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 胞内细胞因子及表面分子荧光染色试剂
1.1.6 体内CTL染色主要试剂
1.1.7 NK细胞杀伤试验所用试剂
1.1.8 腹腔巨噬细胞吞噬试验主要试剂
1.1.9 内毒素检测所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 动物分组及免疫
2.2 血样采集
2.3 内毒素检测
2.4 OVA特异性IgG水平的检测
2.5 OVA特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.6 T淋巴细胞增殖能力检测
2.7 脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.8 胞内细胞因子染色及检测
2.9 体内CTL杀伤能力检测
2.9.1 靶细胞的制备
2.9.2 小鼠体内CTL杀伤活性检测
2.10 NK细胞杀伤能力检测
2.11 腹腔巨噬细胞吞噬活性检测
2.12 共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的表达水平的检测
2.13 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达水平的检测
2.14 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对血清特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RCPS对血清特异性抗体亚类IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影响
3.3 RCPS对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RCPS对脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量的影响
3.5 RCPS对胞内细胞因子表达水平的影响
3.5.1 CD4~+T细胞IL-2表达水平
3.5.2 CD4~+T细胞IL-4表达水平
3.5.3 CD4~+T细胞IFN-γ表达水平
3.5.4 CD8~+T细胞IFN-γ表达水平
3.6 RCPS对CTL体内杀伤能力的影响
3.7 RCPS对NK杀伤能力的影响
3.8 RCPS对腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
3.9 RCPS对树突细胞共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)表达水平的影响
3.9.1 共刺激信号分子CD40表达水平
3.9.2 共刺激信号分子CD80表达水平
3.9.3 共刺激信号分子CD86表达水平
3.10 RCPS对CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的表达水平的影响
3.11 RCPS对试验小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RCPS对OVA受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RCPS对OVA受免小鼠细胞因子的影响
4.3 RCPS对OVA受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.3.1 RCPS对OVA受免小鼠T淋巴细胞增殖能力的影响
4.3.2 RCPS对OVA受免小鼠CTL、NK细胞杀伤能力的影响
4.3.3 RCPS对OVA受免小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
4.4 RCPS对OVA受免小鼠树突细胞(DCs)成熟的影响
4.5 RCPS对OVA受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的影响
4.6 RCPS对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第六章 川牛膝多糖对小鼠注射口蹄疫疫苗免疫反应的影响及分子机制研究
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 川牛膝多糖
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 细胞因子及表面分子荧光染色试剂
1.1.6 体内CTL染色主要试剂
1.1.7 NK细胞杀伤试验所用试剂
1.1.8 腹腔巨噬细胞吞噬试验所需试剂
1.1.9 Real-Time PCR试验所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 动物分组及免疫
2.2 血样采集
2.3 FMDV特异性IgG水平的检测
2.4 FMDV特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.5 T细胞增殖能力检测
2.6 胞内细胞因子染色及检测
2.7 体内CTL杀伤能力检测
2.7.1 靶细胞的制备
2.7.2 小鼠体内CTL杀伤活性检测
2.8 NK细胞杀伤能力检测
2.9 腹腔巨噬细胞吞噬试验
2.10 Real-Time PCR检测细胞因子及信号通路分子
2.10.1 总RNA的提取
2.10.2 cDNA第一链的合成
2.10.3 PCR引物的设计
2.10.4 Real-time PCR反应体系及反应程序
2.11 共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的检测
2.12 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的检测
2.13 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对血清FMDV特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RCPS对血清FMDV特异性抗体亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b)水平的影响
3.3 RCPS对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RCPS对胞内细胞因子表达水平的影响
3.4.1 CD4~+T细胞IL-2表达水平
3.4.2 CD4~+T细胞IL-4表达水平
3.4.3 CD4~+T细胞IFN-γ表达水平
3.4.4 CD8~+T细胞IFN-γ表达水平
3.5 RCPS对CTL体内杀伤能力的影响
3.6 RCPS对NK体内杀伤能力的影响
3.7 RCPS对腹腔巨噬细胞的吞噬活性的影响
3.8 RCPS对DCs共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的表达水平的影响
3.8.1 共刺激信号分子CD40表达水平
3.8.2 共刺激信号分子CD80表达水平
3.8.3 共刺激信号分子CD86表达水平
3.9 RCPS对树突细胞MHC Ⅰ、MHC Ⅱ mRNA表达水平的影响
3.10 RCPS对DC趋化因子受体CXCR4、CCR7 mRNA表达水平的影响
3.11 RCPS对脾淋巴细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的mRNA表达水平
3.12 RCPS对脾淋巴细胞中转录因子T-bet和GATA-3的mRNA表达水平的影响
3.13 RCPS对脾淋巴细胞中TLR-2、TLR-4 mRNA表达水平的影响
3.14 RCPS对脾淋巴细胞中TGF-β mRNA表达水平的影响
3.15 RCPS对CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞表达水平的影响
3.16 RCPS对试验小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RCPS对FMDV受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RCPS对FMDV受免小鼠细胞因子的产生和初始T细胞分化的影响
4.3 RCPS对FMDV受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.3.1 RCPS对FMDV受免小鼠T淋巴细胞增殖能力的影响
4.3.2 RCPS对FMDV受免小鼠CTL、NK细胞杀伤能力的影响
4.3.3 RCPS对FMDV受免小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
4.4 RCPS对FMDV受免小鼠树突细胞成熟及迁移的影响
4.4.1 RCPS对树突细胞成熟的影响
4.4.2 RCPS对树突细胞迁移的影响
4.5 RCPS对FMDV受免小鼠TOLL样受体(TLR-2,TLR-4)的影响
4.6 RCPS对FMDV受免小鼠转化生长因子β(TGF-β)的影响
4.7 RCPS对FMDV受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的影响
4.8 RCPS对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第七章 全文结论
本研究的创新点
有待进一步研究的问题
附录：试验的部分图片
致谢
攻读博士期间发表的学术论文及参加科研情况
本文编号：4007079
【文章页数】：171 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 研究背景
第一节 川产道地药材免疫调节作用的研究进展
1 川牛膝的免疫调节作用
1.1 对体液免疫的影响
1.2 对细胞免疫的影响
1.3 对红细胞免疫的影响
1.4 对机体免疫低下的保护作用
2 杜仲的免疫调节作用
2.1 对体液免疫的影响
2.2 对细胞免疫的影响
2.3 对免疫器官的影响
3 川明参的免疫调节作用
3.1 对体液免疫的影响
3.2 对细胞免疫的影响
4 川麦冬免疫调节作用
4.1 对细胞免疫的影响
4.2 对免疫器官的影响
4.3 对免疫低下的保护作用
4.4 对过敏反应的影响
5 川续断免疫调节作用
5.1 对细胞免疫的影响
5.2 对免疫低下的保护作用
6 丹参的免疫调节作用
6.1 对细胞免疫的影响
6.2 对红细胞免疫的影响
6.3 对免疫器官的影响
6.4 对细胞因子的影响
6.5 对机体免疫低下的保护作用
7 川泽泻的免疫调作用
8 川芎的免疫调节作用
9 川白芷免疫调节作用
10 川佛手的免疫调节作用
第二节 中药多糖免疫调节作用的研究进展
1 中药多糖的免疫调节作用
1.1 对体液免疫的影响
1.2 对细胞免疫的影响
1.3 对细胞因子的影响
1.4 对红细胞免疫的影响
1.5 对细胞毒淋巴细胞(NK,CTL)杀伤活性的影响
1.6 对单核吞噬细胞系统的影响
2 中药多糖免疫调节作用的途径
2.1 通过促进树突细胞成熟和迁移途径激活机体免疫反应
2.1.1 树突细胞的来源及其在免疫反应中的作用
2.1.2 树突细胞的迁移在免疫反应中的作用
2.1.3 树突细胞的成熟在免疫反应中的作用
2.2 通过Toll样受体通路激活免疫反应
2.2.1 Toll样受体在机体免疫反应中的作用
2.2.2 免疫增强剂对Toll样受体的调节
2.3 通过CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞发挥调节作用
2.3.1 调节性Treg细胞在机体免疫反应中的作用
2.3.2 免疫增强剂对Treg细胞的调节作用
第三节 中药川牛膝的研究进展
1 川牛膝的本草考证
2 栽培、加工炮制与品质研究
3 药理作用
3.1 对血液循环系统的影响
3.2 对机体免疫功能的影响
3.3 对泌尿生殖系统的影响
3.4 抗肿瘤作用
3.5 抗病毒作用
3.6 抗衰老作用
3.7 抗炎作用
3.8 补益作用
4 临床应用概况
第四节 立题依据、研究内容、技术路线与方法
1 立题依据
2 研究内容、技术路线与方法
2.1 研究内容
2.2 技术路线
2.3 方法
参考文献
第二章 十种川产道地药材水提物对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 试验用中药
1.1.2 免疫试剂
1.1.3 ELISA主要试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 中药水提物的制备
2.2 动物分组和免疫程序
2.3 血样采集
2.4 OVA特异性IgG水平的检测
2.5 OVA特异性IgG亚类水平的检测
2.6 统计学分析
3 结果
3.1 十种中药水提物对血清中OVA特异性IgG抗体水平的影响
3.2 三种中药水提物对血清中OVA特异性抗体亚类IgG1、IgG2a、IgG2b水平的影响
4 讨论
5 小结
第三章 不同剂量川牛膝水提物对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 中药
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 细胞因子检测所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 川牛膝水提物的制备
2.2 动物分组和免疫程序
2.3 血样采集
2.4 内毒素检测
2.5 OVA特异性IgG水平的检测
2.6 OVA特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.7 T淋巴细胞增殖能力检测
2.8 淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.9 统计学分析
3 结果
3.1 RC对血清OVA特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RC对血清OVA特异性抗体亚类IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影响
3.3 RC对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RC对脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量的影响
3.5 RC对小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RC对OVA受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RC对OVA受免小鼠细胞因子的影响
4.3 RC对OVA受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.4 RC对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第四章 川牛膝多糖体外免疫活性研究
1 材料
1.1 主要试剂与药品
1.1.1 川牛膝多糖
1.1.2 测定淋巴细胞最大安全浓度所用试剂
1.1.3 淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.4 细胞因子检测所用试剂
1.1.5 NK细胞杀伤试验染色主要试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 对脾淋巴细胞最大安全浓度测定
2.2 淋巴细胞增殖能力检测
2.3 脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.4 NK细胞杀伤活力检测
2.4.1 效应细胞的制备
2.4.2 K562细胞的复苏及培养
2.4.3 细胞的传代与培养
2.4.4 细胞计数和细胞活力
2.4.5 靶细胞(K562)染色
2.4.6 NK细胞杀伤活力检测
2.5 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对脾淋巴细胞最大无毒浓度的测定
3.2 RCPS体外对淋巴细胞增殖的影响
3.3 RCPS体外对脾淋巴细胞分泌细胞因子能力的影响
3.4 RCPS在体外对NK细胞杀伤活性的影响
4 讨论
4.1 RCPS在体外对淋巴细胞的毒性
4.2 RCPS在体外对淋巴细胞增值能力的影响
4.3 RCPS在体外对淋巴细胞分泌细胞因子的影响
4.4 RCPS在体外对NK细胞杀伤活性的影响
5 小结
参考文献
第五章 川牛膝多糖对小鼠注射卵清白蛋白(OVA)免疫反应的影响及机理研究
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 川牛膝多糖
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 胞内细胞因子及表面分子荧光染色试剂
1.1.6 体内CTL染色主要试剂
1.1.7 NK细胞杀伤试验所用试剂
1.1.8 腹腔巨噬细胞吞噬试验主要试剂
1.1.9 内毒素检测所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 动物分组及免疫
2.2 血样采集
2.3 内毒素检测
2.4 OVA特异性IgG水平的检测
2.5 OVA特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.6 T淋巴细胞增殖能力检测
2.7 脾淋巴细胞培养上清液中细胞因子浓度的检测
2.8 胞内细胞因子染色及检测
2.9 体内CTL杀伤能力检测
2.9.1 靶细胞的制备
2.9.2 小鼠体内CTL杀伤活性检测
2.10 NK细胞杀伤能力检测
2.11 腹腔巨噬细胞吞噬活性检测
2.12 共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的表达水平的检测
2.13 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达水平的检测
2.14 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对血清特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RCPS对血清特异性抗体亚类IgG1,IgG2a,IgG2b水平的影响
3.3 RCPS对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RCPS对脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量的影响
3.5 RCPS对胞内细胞因子表达水平的影响
3.5.1 CD4~+T细胞IL-2表达水平
3.5.2 CD4~+T细胞IL-4表达水平
3.5.3 CD4~+T细胞IFN-γ表达水平
3.5.4 CD8~+T细胞IFN-γ表达水平
3.6 RCPS对CTL体内杀伤能力的影响
3.7 RCPS对NK杀伤能力的影响
3.8 RCPS对腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
3.9 RCPS对树突细胞共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)表达水平的影响
3.9.1 共刺激信号分子CD40表达水平
3.9.2 共刺激信号分子CD80表达水平
3.9.3 共刺激信号分子CD86表达水平
3.10 RCPS对CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的表达水平的影响
3.11 RCPS对试验小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RCPS对OVA受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RCPS对OVA受免小鼠细胞因子的影响
4.3 RCPS对OVA受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.3.1 RCPS对OVA受免小鼠T淋巴细胞增殖能力的影响
4.3.2 RCPS对OVA受免小鼠CTL、NK细胞杀伤能力的影响
4.3.3 RCPS对OVA受免小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
4.4 RCPS对OVA受免小鼠树突细胞(DCs)成熟的影响
4.5 RCPS对OVA受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的影响
4.6 RCPS对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第六章 川牛膝多糖对小鼠注射口蹄疫疫苗免疫反应的影响及分子机制研究
1 材料
1.1 主要试剂
1.1.1 动物免疫试剂
1.1.2 川牛膝多糖
1.1.3 ELISA所用试剂
1.1.4 T淋巴细胞增殖所用试剂
1.1.5 细胞因子及表面分子荧光染色试剂
1.1.6 体内CTL染色主要试剂
1.1.7 NK细胞杀伤试验所用试剂
1.1.8 腹腔巨噬细胞吞噬试验所需试剂
1.1.9 Real-Time PCR试验所用试剂
1.2 主要仪器
1.3 试验动物
2 方法
2.1 动物分组及免疫
2.2 血样采集
2.3 FMDV特异性IgG水平的检测
2.4 FMDV特异性抗体亚类(IgG1、IgG2a和IgG2b)水平的检测
2.5 T细胞增殖能力检测
2.6 胞内细胞因子染色及检测
2.7 体内CTL杀伤能力检测
2.7.1 靶细胞的制备
2.7.2 小鼠体内CTL杀伤活性检测
2.8 NK细胞杀伤能力检测
2.9 腹腔巨噬细胞吞噬试验
2.10 Real-Time PCR检测细胞因子及信号通路分子
2.10.1 总RNA的提取
2.10.2 cDNA第一链的合成
2.10.3 PCR引物的设计
2.10.4 Real-time PCR反应体系及反应程序
2.11 共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的检测
2.12 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的检测
2.13 统计学分析
3 结果
3.1 RCPS对血清FMDV特异性IgG抗体水平的影响
3.2 RCPS对血清FMDV特异性抗体亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b)水平的影响
3.3 RCPS对T淋巴细胞增殖能力的影响
3.4 RCPS对胞内细胞因子表达水平的影响
3.4.1 CD4~+T细胞IL-2表达水平
3.4.2 CD4~+T细胞IL-4表达水平
3.4.3 CD4~+T细胞IFN-γ表达水平
3.4.4 CD8~+T细胞IFN-γ表达水平
3.5 RCPS对CTL体内杀伤能力的影响
3.6 RCPS对NK体内杀伤能力的影响
3.7 RCPS对腹腔巨噬细胞的吞噬活性的影响
3.8 RCPS对DCs共刺激信号分子(CD40、CD80、CD86)的表达水平的影响
3.8.1 共刺激信号分子CD40表达水平
3.8.2 共刺激信号分子CD80表达水平
3.8.3 共刺激信号分子CD86表达水平
3.9 RCPS对树突细胞MHC Ⅰ、MHC Ⅱ mRNA表达水平的影响
3.10 RCPS对DC趋化因子受体CXCR4、CCR7 mRNA表达水平的影响
3.11 RCPS对脾淋巴细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的mRNA表达水平
3.12 RCPS对脾淋巴细胞中转录因子T-bet和GATA-3的mRNA表达水平的影响
3.13 RCPS对脾淋巴细胞中TLR-2、TLR-4 mRNA表达水平的影响
3.14 RCPS对脾淋巴细胞中TGF-β mRNA表达水平的影响
3.15 RCPS对CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞表达水平的影响
3.16 RCPS对试验小鼠体重的影响
4 讨论
4.1 RCPS对FMDV受免小鼠体液免疫反应的影响
4.2 RCPS对FMDV受免小鼠细胞因子的产生和初始T细胞分化的影响
4.3 RCPS对FMDV受免小鼠细胞免疫反应的影响
4.3.1 RCPS对FMDV受免小鼠T淋巴细胞增殖能力的影响
4.3.2 RCPS对FMDV受免小鼠CTL、NK细胞杀伤能力的影响
4.3.3 RCPS对FMDV受免小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
4.4 RCPS对FMDV受免小鼠树突细胞成熟及迁移的影响
4.4.1 RCPS对树突细胞成熟的影响
4.4.2 RCPS对树突细胞迁移的影响
4.5 RCPS对FMDV受免小鼠TOLL样受体(TLR-2,TLR-4)的影响
4.6 RCPS对FMDV受免小鼠转化生长因子β(TGF-β)的影响
4.7 RCPS对FMDV受免小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的影响
4.8 RCPS对小鼠的安全性
5 小结
参考文献
第七章 全文结论
本研究的创新点
有待进一步研究的问题
附录：试验的部分图片
致谢
攻读博士期间发表的学术论文及参加科研情况
本文编号：4007079
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/4007079.html
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