猪繁殖障碍疫病4种病毒多重PCR方法的建立及初步应用

发布时间：2017-05-27 21:10

  本文关键词：猪繁殖障碍疫病4种病毒多重PCR方法的建立及初步应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立可用于临床同时检测猪细小病病毒(PPV)、猪圆环病病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(NA-PRRSV型和EU-PRRSV型)4种猪繁殖障碍性疫病病毒的多重PCR检测方法,并进行初步临床应用。方法参考Gen Bank中PPV、PRV、PCV2、EU-PRRSV和NA-PRRSV的全基因序列,利用Oligo6.0软件针对全基因保守序列,分别设计并合成5对特异性引物,其产物分别为142bp、547bp、705bp、1367bp和331bp。在单重PCR基础上,建立多重PCR检测方法,对多重PCR反应条件进行优化及其特异性、敏感性、重复性进行检验,并对部分临床样本与文献方法进行平行试验验证该方法的可靠性。利用所建立的多重PCR检测方法对来自辽西5市的325个样本进行应用检验。结果多重PCR方法中,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV最佳引物浓度分别为1.0μmol/L、0.5μmol/L、0.5μmol/L、1.5μmol/L和1.5μmol/L,退火温度为60℃,最低检测核酸量分别为155.0pg、45.2pg、17.2 pg、14.2 pg和43.6 pg,均已达到pg级,在不同时间对相同样本重复检验6次,结果一致,与文献方法进行平行试验,符合率为100%。利用多重PCR检测方法对临床采集的疑似猪病料的325份样品进行检测,结果表明,PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV的感染率分别为21.23%、53.53%、57.23%、52.00%和2.77%。结论本研究建立了PPV、PRV、PCV2、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR检测方法,该方法具有快速、准确、敏感等优点。可以运用于临床诊断。
【关键词】：多重PCR 猪细小病毒 猪伪狂犬病毒 猪圆环病毒病2型 猪繁殖与呼吸综合征 应用
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-15
• 结果15-24
• 讨论24-27
• 结论27-28
• 本研究创新性的自我评价28-29
• 参考文献29-32
• 附录32-58
• 一、文献综述 猪繁殖障碍疫病4种病毒检测方法研究进展32-55
• 参考文献45-55
• 二、在学期间科研成绩55-56
• 三、致谢56-57
• 四、个人简介57-58

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