猪圆环病毒3型陕西株Cap基因的克

发布时间：2024-12-02 22:21

　　 为了克隆猪圆环病毒3型Cap基因并进行序列分析和原核表达,参考GenBank上已发表的PCV3(KY418606.1)Cap基因序列,合成1对上、下游引物,PCR扩增Cap基因,进行序列分析和原核表达。结果显示,成功克隆到642 bp的Cap基因,核苷酸序列分析显示,PCV3 Cap基因与国内分离株核苷酸同源性最高为95.97%,氨基酸分析显示Cap蛋白不含信号肽和跨膜区。经IPTG诱导后获得了分子质量约35 ku的Cap蛋白,该蛋白能与PCV3阳性血清结合,具备良好的抗原性。成功克隆并原核表达PCV3陕西株Cap基因,为进一步建立PCV3的快速检测方法和研制PCV3亚单位疫苗奠定了基础。

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【部分图文】：

图1 PCV3陕西株Cap基因的PCR扩增

以BamHⅠ和XhoⅠ两个限制性内切酶双酶切重组表达质粒,经10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定,出现1条约642bp的目的条带,以及1条约5360bp的载体条带(图2),表明重组质粒构建成功。图2重组质粒pET-28a-Cap的双酶切鉴定

图2 重组质粒pET-28a-Cap的双酶切鉴定

图1PCV3陕西株Cap基因的PCR扩增2.3Cap基因生物信息学分析

图3 Cap蛋白的生物信息学分析

在分析陕西株PCV3-Cap基因同源性的基础上,绘制Cap基因核苷酸序列系统进化树(图4),从进化树可知,陕西分离株Cap基因与韩国分离株(KY996345.1)、美国分离株(KX778720.1)、中国重庆分离株(KY075994.1)在同一进化分支上。不同来源的PCV3分离株....

图4 Cap核苷酸序列系统进化树

图3Cap蛋白的生物信息学分析2.4重组Cap蛋白的原核表达

本文编号：4014003