腺病毒介导的hsp70过表达对H 2 O 2 诱导BRL细胞凋亡的保护作用研究

发布时间：2024-12-03 21:07

　　氧化应激损伤会导致肝细胞发生凋亡。Hsp70具有分子伴侣、抗氧化及抗凋亡等生物学功能，可提高细胞的应激耐受性，保护细胞免受氧化和凋亡损伤。基于此，本试验采用腺病毒感染的方法，观察Hsp70过表达对H2O2诱导BRL细胞（Buffalo大鼠肝细胞）凋亡的影响。首先，选用不同浓度H2O2（250μmol/L、200μmol/L、150μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、0μmol/L）作用BRL细胞2h后，分别采用WST-1法检测BRL细胞活力，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，Western Blotting法检测胞内Caspase3蛋白表达量，通过上述试验筛选出诱导BRL细胞凋亡的最佳的H2O2作用浓度，接着以此浓度施加于BRL细胞，检测其蛋白质羰基含量和总SOD的活力，发现此H2O2作用后BRL细胞凋亡，同时也受到氧化损伤；然后，采用腺病毒感染各组细胞，将细胞分为六组：空白对照组（仅有培养液的BRL细胞），Ad-CMV-Null组（感染腺病毒空载体的BRL细胞），Ad-CMV-hsp70组（感染介导hsp70重组腺病毒的BRL细胞），H2O2组（H2...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
第一章 文献综述
    1.1 细胞凋亡
        1.1.1 简介
        1.1.2 细胞凋亡诱因
        1.1.3 细胞凋亡介质
    1.2 氧化应激
        1.2.1 简介
        1.2.2 内外源活性氧诱导细胞凋亡
        1.2.3 氧化应激诱导细胞凋亡的机理
    1.3 热休克蛋白
        1.3.1 简介
        1.3.2 Hsp70 与细胞凋亡
    1.4 研究的背景和主要内容
        1.4.1 研究背景
        1.4.2 研究内容
第二章 H₂O₂诱导 BRL 细胞凋亡损伤
    2.1 试验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 试验设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 主要试剂的配制
        2.2.2 BRL 细胞培养
        2.2.3 H₂O₂作用细胞
        2.2.4 H₂O₂对 BRL 细胞造成的凋亡损伤
        2.2.5 H₂O₂对 BRL 细胞造成的氧化损伤
        2.2.6 统计学处理
    2.3 试验结果
        2.3.1 BRL 细胞生长状态观察
        2.3.2 H₂O₂对 BRL 细胞凋亡损伤的影响
        2.3.3 H₂O₂对 BRL 细胞中蛋白羰基含量和总 SOD 活力的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 过表达 Hsp70 对 H₂O₂诱导细胞凋亡的影响
    3.1 试验材料
        3.1.1 细胞系
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 试验设备
        3.1.4 病毒
    3.2 试验方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 试验分组及细胞处理
        3.2.3 Hsp70 mRNA 及蛋白水平表达情况
        3.2.4 细胞凋亡相关蛋白的检测
        3.2.5 流式细胞术检测细胞凋亡率
        3.2.6 统计学分析
    3.3 试验结果
        3.3.1 Hsp70 mRNA 及蛋白水平表达情况
        3.3.2 细胞凋亡相关蛋白的检测
        3.3.3 流式细胞术检测细胞凋亡率
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：4014143