犬新孢子虫宿主细胞结合蛋白筛选及其免疫原性分析

发布时间：2025-01-06 21:56

　　新孢子虫病是一种新发现的，由新孢子虫引起的胞内寄生性原虫病，主要引起孕畜流产或产死胎，以及新幼畜的运动障碍和神经系统疾病，该病呈世界性分布，危害严重，给养殖业带来极大的经济损失，但目前尚无有效的预防新孢子虫病的疫苗。本研究在构建新孢子虫速殖子T7噬菌体展示文库基础上，利用Vero细胞对文库进行筛选后获得了宿主细胞结合蛋白，并利用筛选后的蛋白制备了新孢子虫重组蛋白苗和核酸疫苗，并确定了单独免疫和联合免疫的保护效果，为新孢子虫病的预防奠定了基础。 利用T7select10-3b载体构建了新孢子虫速殖子T7噬菌体展示文库，扩增后文库滴度为5.24×1012pfu/mL，库容量为8.38×1012个重组子，文库重组率为100%。利用Vero细胞对构建的展示文库进行筛选，经过5轮亲和筛选后获得了9个阳性克隆，经测序后Blast分析，包括一个致密颗粒GRA7基因、5个核糖体基因和3个假定蛋白基因。本研究选取了其中一个假定蛋白和GRA7蛋白作为疫苗候选，以研究它们的保护效果。选择的假定蛋白氨基酸序列与弓形虫酰基甘油脂酶同源性为80%，暂根据其编码的蛋白大小命名为NcP78。 利用原核表达载...

【文章页数】：150 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1新孢子虫生活史示意图a（引自文献18），b（引自文献19）

图1新孢子虫生活史示意图a（引自文献18），b（引自文献19）Fig1.ThelifecycleofNeosporacaninum（awasfromreference18andbwasfromreferenc3新孢子虫动物模型及体外培....

图2新孢子虫对宿主细胞的粘附和侵入过程示意图(引自文献50，其中a、b、c、d代表着新孢子虫由黏附到侵入宿主细胞的整个过程）

第一篇文献综述第一章新孢子虫病概述种粘附没有持续的方向定位[48]，其粘附过程是由微线体分泌的粘附相关蛋白所介与宿主细胞膜上的相应受体结合后形成可移动的连接区域。之后棒状体分泌蛋白对进行修饰[49,50]，宿主细胞的细胞膜内陷并形成纳虫泡，同时新孢子虫与宿主细胞形移动的连接....

图3.牛的新孢子虫病垂直传播机理示意图（引自文献6）

第一篇文献综述第一章新孢子虫病概述繁殖后有可能进入淋巴细胞中，之后速殖子释放到血液中，对胎盘造成损伤。播即怀孕期的再次感染，是目前最常见的感染模式。当胎儿或胎盘被损害后，胎性进而导致流产[65]。胎盘传播可以发生在误食新孢子虫卵囊后导致的感染（外性感染的牛的再次感染（内源性....

图1.1a新孢子虫速殖子Vero细胞培养照片（60×10)

新孢子虫在Vero细胞中培养并经吖啶橙染色后拍照观察（结果如1.1a所示），待培养最佳时间用percoll试剂进行纯化并拍照（结果如图1.1b所示）。图1.1a新孢子虫速殖子Vero细胞培养照片（60×10)图1.1b新孢子虫速殖子纯化照片（60×10)F....

本文编号：4024042