1株牛病毒性腹泻病毒分离毒株的基因组特征

发布时间：2025-01-18 15:48

　　 旨在从宁夏某奶牛群持续感染牛分离牛源牛病毒性腹泻病毒（BVDV）,并解析其基因组特征,为研究我国不同地区BVDV分离株遗传演化规律提供理论依据。利用BVDV抗原检测试剂盒检测宁夏回族自治区银川市某示范区的240头高产奶牛间隔两周的双份抗凝血,筛选持续感染牛,分离血液淋巴细胞制备裂解液接种牛肾细胞（MDBK）,分离鉴定获得BVDV株,克隆测序获得全基因组序列,比较分析其遗传演化关系。从该示范区高产奶牛筛选获得2头持续感染牛,分离获得1株非致细胞病变型BVDV,命名为NX2019/01。测序获得基因组全序列（12 107 nt）,其中ORF长11 703 nt,编码3 898个氨基酸。在基因组水平,NX2019/01株与我国SD-15、ZM-95、XC、LN-1等1m亚型分离株相似性较高（92.17%～93.84%）,但E^rns、E1以及E2基因存在较大差异。示范区同群牛急性感染BVDV时,毒株E2蛋白N端编码区核苷酸突变可导致第9位或第67位氨基酸变异。重组分析表明,NX2019/01株E2基因179—288位核苷酸区段以及ZM-95株E1基因168位—E2基因33...

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【部分图文】：

图1 牛EDTA抗凝血BVDV抗原检测结果

利用抗原检测试剂盒检测抗凝血中的BVDV抗原,结果如图1所示,从240份样品共检出4份为BVD抗原阳性,复检判定两头犊牛(No.221、No.389)为BVDV持续感染牛。2.2RT-PCR检测

图2 BVDV基因片段RT-PCR扩增结果

利用初检病毒抗原阳性(4份)和复检阳性(2份)的抗凝血提取总RNA,分别利用5′UTR通用引物和E2蛋白N端编码区引物进行RT-PCR检测,结果均扩增获得预期目的条带(图2)。测序所得BVDV5′UTR核苷酸只有1～2个碱基的差异,一致性为98.9%～100%,与GenBank....

图3 免疫荧光法鉴定NX2019/01分离株(200×)

利用病毒抗原含量较高的复检阳性牛(No.389)抗凝血制备淋巴细胞裂解液,接种MDBK细胞盲传至第6代仍未出现细胞病变,但第6代细胞裂解液接种MDBK细胞48h利用免疫荧光鉴定可观察到绿色荧光(图3),说明成功获得NCP型BVDV分离株,命名为NX2019/01。2.4病毒....

图4 RT-PCR扩增NX2019/01分离株基因组

NX2019/01株基因组长12107bp(5′UTR和3′UTR部分测定),其ORF长11703nt,编码3898个氨基酸。毒株编码区组成包括N基因(504nt)、C基因(312nt)、Erns基因(681nt)、E1基因(585nt)、E2基因(1122....

本文编号：4028814