表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组禽腺病毒的构建

发布时间：2025-03-20 01:30

　　禽腺病毒血清型 4 型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)毒株CH/HNJZ/2015是2015年分离自我国河南的一株高致病性流行病毒株,属于禽腺病毒属中的C种,是一种没有囊膜包裹的双股DNA病毒,是肝炎-心包积液综合征(Hepatitis-hydropericardium syndrome,HHS)的主要病原,但其致病机理尚不明确,许多未知基因的功能还有待进一步研究,因此有必要建立针对FAdV-4 CH/HNJZ/2015毒株的反向遗传操作体系,以帮助这些问题得到解决。此外,腺病毒具有病毒粒子相对稳定、致病力低、宿主范围广、遗传操作较容易、病毒滴度高、易于储存以及能装载较大外源基因等优点,在基础研究、疫苗研发、基因治疗等方面被广泛研究和应用,被认为是基因转移中最有潜力的载体之一。鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD),是由鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引发的一种高致死率的传染性疾病,鸡感染该病毒后导致免疫器官法氏囊严重受损,使机体对免疫应答产生抑制...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 绪论
    1.1 禽腺病毒血清4型及其引起的相关疾病
        1.1.1 分类地位
        1.1.2 形态结构
        1.1.3 基因组结构与功能
        1.1.4 流行病学
    1.2 禽腺病毒反向遗传学技术与基因工程载体的研究进展
        1.2.1 禽腺病毒反向遗传学技术
        1.2.2 禽腺病毒基因工程载体的研究进展
    1.3 鸡传染性法氏囊病及其防控
        1.3.1 鸡传染性法氏囊病病毒病原学研究进展
        1.3.2 鸡传染性法氏囊病疫苗研究进展
    1.4 Red/ET重组工程
        1.4.1 Red/ET重组工程简介
        1.4.2 Red/ET重组工程的工作原理
        1.4.3 Red/ET重组工程的操作步骤
        1.4.4 Red/ET重组工程的应用
    1.5 立题依据和意义
    1.6 技术路线
第二章 高致病性禽腺病毒4型流行毒株反向遗传操作体系的建立
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、质粒和细胞
        2.1.2 分子生物学试剂
        2.1.3 仪器设备
        2.1.4 培养基和溶液
        2.1.5 分子生物学分析工具
        2.1.6 寡核苷酸合成
    2.2 实验方法
        2.2.1 PCR
        2.2.2 酒精沉淀
        2.2.3 大肠杆菌的电转化方法
        2.2.4 大肠杆菌中质粒的小提制备和酶切鉴定
        2.2.5 禽腺病毒血清型4型毒株CH/HNJZ/2015的基因组制备
        2.2.6 FAdV-4毒株CH/HNJZ/2015全长基因组感染性克隆的构建
        2.2.7 重组病毒rHNJZ的拯救
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 直接克隆载体的PCR扩增
        2.3.2 FAdV-4毒株CH/HNJZ/2015基因组的直接克隆
        2.3.3 重组病毒rHNJZ的拯救
        2.3.4 重组病毒rHNJZ在LMH细胞上的复制动态
    2.4 总结与讨论
第三章 表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组禽腺病毒的构建
    引言
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株、质粒、毒株及细胞
        3.1.2 主要的仪器和试剂
        3.1.3 培养基和溶液
        3.1.4 寡核苷酸合成和测序
    3.2 实验方法
        3.2.1 质粒pR6K-CMV-ampccdB-BGHpA的构建
        3.2.2 重组病毒质粒p15A-cm-HNJZ-1966-IBDV-VP2的构建
        3.2.3 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的拯救
        3.2.4 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中VP2基因的PCR鉴定
        3.2.5 VP2蛋白在重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中的表达检测
        3.2.6 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的体外复制动力学研究
        3.2.7 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的遗传稳定性评价
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 质粒pR6K-CMV-ampccdB-BGHpA的构建
        3.3.2 重组质粒p15A-cm-HNJZ-1966-IBDV-VP2的构建
        3.3.3 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的拯救
        3.3.4 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2中VP2基因的表达
        3.3.5 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2在LMH细胞上的复制动态
        3.3.6 重组病毒rHNJZ-1966-IBDV-VP2的遗传稳定性鉴定
    3.4 总结与讨论
第四章 总结与展望
    4.1 高致病性禽腺病毒4型流行毒株反向遗传操作体系的建立
    4.2 表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的重组禽腺病毒的构建
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的研究论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：4037167