MiR-208b通过抑制Mettl8表达调控骨骼肌纤维类型转化

发布时间：2025-03-20 02:53

　　骨骼肌是动物肉类产品的主要来源,其主要的组成单位为肌纤维。成熟的骨骼肌纤维根据不同的肌球蛋白重链亚型（Myosin heavy chain isoforms,MyHC）分为I、IIA、IIB、IIX四种不同类型,分别由MyHC I（Myh7）、My HC IIA（Myh2）、My HC IIB（Myh4）和MyHC IIX（Myh1）标记,不同类型肌纤维之间可以发生转化。本课题组前期发现MSTN（Myostatin）基因编辑梅山猪的骨骼肌中,I型肌纤维减少,IIB型肌纤维增多,且miR-208b表达量下调,靶基因Mettl8（Methyltransferase like 8）表达量上升,揭示其中存在一定联系。由于miRNA的种子序列高度保守,本研究以C2C12成肌细胞和小鼠为对象,结合分子实验、细胞实验和动物模型的构建,旨在探究miR-208b靶向Mettl8影响骨骼肌肌纤维类型转化中的分子机制。本研究首先利用RT-qPCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction）和WB（Western Blot）验证前期测序结果并探究miR-2...

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摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 骨骼肌肌纤维研究进展
        1.1.1 骨骼肌肌纤维的形成和成熟
        1.1.2 骨骼肌肌纤维的分类
        1.1.3 不同类型肌纤维的特点
        1.1.4 肌纤维转化及分子机制
    1.2 MiRNA的研究进展
        1.2.1 MiRNA的生成和作用机制
        1.2.2 影响肌纤维类型转化的miRNA
    1.3 Mettl8的研究进展
    1.4 研究目的和意义
第二章 梅山猪中mi R-208b和 Mettl8 的表达规律
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 试验动物及样品采集
        2.2.2 仪器设备
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 MiR-208b在梅山猪中的表达规律
        2.3.2 Mettl8在梅山猪中的表达规律
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 MiR-208b对成肌分化过程中My HC表达的影响
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 细胞系
        3.2.2 仪器设备
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 C2C12 细胞成肌分化过程中mi R-208b和 My HC基因的表达规律
        3.3.2 过表达mi R-208b对不同类型肌纤维标记基因My HC表达的影响
        3.3.3 抑制表达mi R-208b对不同肌纤维类型标记基因My HC表达的影响
        3.3.4 MiR-208b影响成肌分化过程中Myh4、Myh7和MYL9 的蛋白表达量
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 MiR-208b靶向Mettl8 调控骨骼肌纤维类型转化
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 细胞系
        4.2.2 仪器设备
        4.2.3 主要试剂耗材
        4.2.4 实验方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 MiR-208b与 Mettl8 靶向关系预测
        4.3.2 MiR-208b与 Mettl8 靶向关系验证
        4.3.3 C2C12 成肌分化过程及过表达/抑制mi R-208b后 Mettl8 的表达量
        4.3.4 Mettl8 对不同肌纤维类型标记基因My HC表达的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 MiR-208b和 Mettl8 基因敲除小鼠模型的构建
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 试验动物
        5.2.2 仪器设备
        5.2.3 主要试剂
        5.2.4 实验方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 MiR-208b和 Mettl8 在小鼠中的组织表达谱
        5.3.2 基因敲除小鼠的制备与鉴定
        5.3.3 基因敲除小鼠体重和骨骼肌形态学变化
        5.3.4 基因敲除小鼠骨骼肌不同类型肌纤维标志基因表达
        5.3.5 基因敲除小鼠骨骼肌能量代谢基因变化
    5.4 讨论
    5.5 小结
第六章 全文结论
    6.1 主要结论
    6.2 创新之处
    6.3 后续工作
参考文献
附录 A
致谢
作者简历



本文编号：4037269