STMN2对海兰褐壳蛋鸡卵巢颗粒细胞Ras-MAPK信号通路的影响

发布时间：2017-05-30 11:03

  本文关键词：STMN2对海兰褐壳蛋鸡卵巢颗粒细胞Ras-MAPK信号通路的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：STMN2(微管去稳蛋白2)是一种在细胞核中表达的微管蛋白。STMN2的主要作用是通过促进微管的解聚或阻止微管的聚合从而影响有丝分裂纺锤体的形成。有文献指出,高产蛋鸡产蛋期脑垂体STMN2表达量显著高于休产期脑垂体STMN2表达量。Ras-MAPK信号途径是细胞内重要的信号通路之一,其参与了多种生理过程的调节,对动物的繁殖有重要作用。实验前期通过查阅文献,可知在禽类颗粒细胞中,STMN2的表达显著升高,推测STMN2可通过Ras-MAPK信号途径调控细胞有丝分裂。因此,通过研究STMN2表达量对颗粒细胞Ras-MAPK信号通路关键因子erk1(细胞外调节蛋白激酶1)、erk2(细胞外调节蛋白激酶2)、ras(大鼠肉瘤蛋白)、elk-1(转录激活因子ETS样蛋白1)mRNA表达量和蛋白表达量,及Ras-MAPK信号通路抑制或激活时STMN2 mRNA表达量和蛋白表达量,探讨STMN2与Ras-MAPK信号途径的相互关系,为提高海兰褐壳蛋鸡产蛋量,提供一种理论依据。本实验选取健康8月龄产蛋期雌性海兰褐壳蛋鸡,原代培养海兰褐壳蛋鸡卵泡颗粒细胞,STMN2过表达腺病毒载体转染原代培养的颗粒细胞,实验分为对照组、空载体组、STMN2过表达组;STMN2低表达载体转染原代培养的颗粒细胞,实验分为STMN2低表达组、空载体组、对照组。选用荧光定量PCR和Western blot检测过表达和低表达各组Ras-MAPK信号通路中关键因子mRNA和蛋白水平表达的影响;颗粒细胞原代培养,加入Ras-MAPK信号通路激活剂和抑制剂,实验分为激活剂组、抑制剂组、对照组,选用荧光定量PCR和Western blot检测STMN2 mRNA和蛋白表达量。结果如下:(1)STMN2过表达对颗粒细胞中Ras-MAPK信号通路关键因子的影响与腺病毒空载体组和对照组相比,STMN2过表达组中erk1、erk2和ras mRNA表达水平均极显著升高(p0.01),elk-1 mRNA表达水平差异显著升高(p0.05);STMN2过表达组中除elk-1蛋白表达水平差异不显著(p0.05)外erk1、erk2、p-erk1、p-erk2和ras蛋白表达水平极显著升高(p0.01)。(2)STMN2低表达对颗粒细胞中Ras-MAPK信号通路关键因子的影响与空载体组和对照组相比,STMN2低表达组中erk1、elk-1 mRNA表达水平极显著降低(p0.01),ras和erk2 mRNA表达水平差异显著降低(p0.05);蛋白表达水平均显著降低(p0.05)。(3)Ras-MAPK信号通路对STMN2表达量的影响与激活剂和对照组相比,抑制剂组中STMN2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(p0.05);与抑制剂和对照组组相比,激活剂组中STMN2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(p0.05)。结果表明:STMN2与Ras-MAPK信号通路相互调节。提示STMN2可通过Ras-MAPK信号通路对卵泡颗粒细胞进行调控,进而促进颗粒细胞的生长、发育,促进排卵。
【关键词】：STMN2 蛋鸡颗粒细胞 Ras-MAPK
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S831
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩写表 110-11
• 中英文缩写表 211-12
• 第一章 文献综述12-16
• 1.1 颗粒细胞12
• 1.2 STMN212-13
• 1.3 MAPK信号通路13-15
• 1.4 本研究的目的意义15-16
• 第二章 STMN2过表达对颗粒细胞Ras-MAPK信号通路的影响16-32
• 2.1 材料方法16-24
• 2.1.1 实验材料16-17
• 2.1.2 方法17-24
• 2.2 结果24-29
• 2.2.1 STMN2过表达腺病毒转染原代培养颗粒细胞24
• 2.2.2 总RNA质量检测24-25
• 2.2.3 荧光定量RCR检测STMN2 mRNA表达结果25-26
• 2.2.4 Western blot检测STMN2蛋白表达结果26
• 2.2.5 目的基因引物特异性检测结果26
• 2.2.6 Ras-MAPK信号通路关键因子mRNA表达结果26-27
• 2.2.7 Ras-MAPK信号通路关键因子蛋白表达结果27-29
• 2.3 讨论29-30
• 2.3.1 STMN2过表达载体腺病毒转染原代培养蛋鸡卵泡颗粒细胞模型的构建29
• 2.3.2 STMN2过表达对Ras-MAPK信号通路的影响29-30
• 2.4 小结30-32
• 第三章 STMN2低表达对颗粒细胞Ras-MAPK信号通路的影响32-40
• 3.1 材料方法32-33
• 3.1.1 材料32
• 3.1.2 方法32-33
• 3.2 结果33-38
• 3.2.1 sh-RNA干扰STMN2表达载体转染原代培养颗粒细胞结果33-34
• 3.2.2 总RNA质量检测34
• 3.2.3 荧光定量检测STMN2 mRNA表达结果34-35
• 3.2.4 Western blot检测STMN2蛋白表达35
• 3.2.5 Ras-MAPK信号通路关键因子mRNA表达结果35-36
• 3.2.6 Western blot检测信号通路关键因子蛋白表达水平36-38
• 3.3 讨论38-39
• 3.3.1 载体选择38
• 3.3.2 通路与卵泡发育38-39
• 3.4 小结39-40
• 第四章 Ras-MAPK信号改变对颗粒细胞STMN2表达的影响40-44
• 4.1 材料与方法40-41
• 4.1.1 主要仪器和设备40
• 4.1.2 方法40-41
• 4.2 结果41-42
• 4.2.1 相对荧光定量PCR检测STMN2 mRNA表达水平41
• 4.2.2 Western blot检测STMN2蛋白表达结果41-42
• 4.3 讨论42-43
• 4.3.1 药品浓度42
• 4.3.2 颗粒细胞STMN2蛋白表达42-43
• 4.4 小结43-44
• 第五章 结论44-46
• 参考文献46-52
• 致谢52-54
• 附录54-58
• 作者简历58

【参考文献】

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本文编号：406972