南宁市本地犬三种血液原虫的初步调查与犬伊氏锥虫病例人工复制实验研究

发布时间：2017-06-08 08:01

  本文关键词：南宁市本地犬三种血液原虫的初步调查与犬伊氏锥虫病例人工复制实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本次实验就巴贝斯虫(Babesia)、犬肝簇虫(Hepatozoon canis)、伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)这三种血液原虫展开在广西南宁市本地犬中的流行病学调查；并通过犬人工接种伊氏锥虫广西株,对犬伊氏锥虫病的病程进行观察与研究；分别使用血虫净、普得安对接种成功的伊氏锥虫病犬进行治疗,对这两种药物的治疗效果进行初步探究,为临床用药提供参考。方法：2013年11月至2014年11月,对在南宁市广西大学动物医院进行就诊的犬只进行血液采集,制作血涂片进行染色镜检,并将采集的血液进行冻存,随意抽取160份血样分别进行三种血液原虫的PCR检测,将获得的目标条带进行克隆测序后,通过BLAST软件在线比对分析。以本实验室保存的从水牛体内分离到的伊氏锥虫广西株为病原,取肉犬8只,3只通过静脉接种、2只通过口服接种,3只为对照组,仅对病程进行观察与研究。另取3只肉犬接种病原,使用血虫净、普得安进行治疗。血虫净连用三天,剂量为0.15-0.2 ml/只；普得安用2次,隔天1次,剂量为3.5 mg/kg。观察比较这两种药物对犬伊氏锥虫病的治疗效果。结果：通过PCR方法检测出巴贝斯虫阳性4份,感染率2.5%,序列比对显示均为韦氏巴贝斯虫亚种；检出1份犬肝簇虫,感染率0-625%；伊氏锥虫未检测到阳性。犬人工接种伊氏锥虫的实验中,通过静脉或者口服接种病原均可引起犬的感染,其中通过静脉接种的2只犬分别在接种后第3和第4天死亡；口服感染的1只犬在接种后第6天于血液中可见虫体,第10天死亡。慢性感染犬只外周血中的虫体呈周期性出现。期间,犬的体温与虫体的周期性变化呈正相关。治疗结果显示,血虫净对犬的伊氏锥虫没有效果,普得安可缓解犬只的情况,但是一个疗程未能完全治愈犬的伊氏锥虫病。我们应当提高对犬血液原虫病的重视,做好防控措施。
【关键词】：犬 巴贝斯虫 犬肝簇虫 伊氏锥虫 PCR 病程
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.292
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 缩略词表12-13
• 第一部分 综述13-24
• 1.1 巴贝斯虫病13-17
• 1.1.1 犬巴贝斯虫病病原的分类与形态14
• 1.1.2 犬巴贝斯虫病原的生活史14
• 1.1.3 犬巴贝斯虫病原的流行病学14-15
• 1.1.4 犬巴贝斯虫病的临床症状15
• 1.1.5 犬巴贝斯虫病的诊断15-16
• 1.1.6 犬巴贝斯虫病的研究近况16-17
• 1.2 肝簇虫病17-20
• 1.2.1 犬肝簇虫的病原特征17-18
• 1.2.2 犬肝簇虫的生活史18
• 1.2.3 犬肝簇虫的流行病学18
• 1.2.4 犬肝簇虫病临床症状18-19
• 1.2.5 犬肝簇虫的诊断19-20
• 1.2.6 犬肝簇虫的研究近况20
• 1.3 锥虫病20-24
• 1.3.1 伊氏锥虫病原形态21
• 1.3.2 伊氏锥虫的生活史21
• 1.3.3 伊氏锥虫流行病学21
• 1.3.4 犬伊氏锥虫病的临床症状21-22
• 1.3.5 伊氏锥虫病的诊断22-23
• 1.3.6 伊氏锥虫病的研究现状23-24
• 第二部分 实验部分24-65
• 第一章 南宁市本地犬三种血液原虫的初步调查24-36
• 2.1 实验材料24-25
• 2.1.1 样品来源24
• 2.1.2 实验材料与器材24-25
• 2.2 实验方法25-28
• 2.2.1 样品采集和处理25
• 2.2.2 DNA抽提25
• 2.2.3 引物的选择与PCR扩增25-27
• 2.2.4 PCR扩增产物的检测与回收27
• 2.2.5 TA-克隆测序27-28
• 2.3 实验结果28-30
• 2.3.1 PCR检测结果与序列比对28-29
• 2.3.2 PCR阳性犬的临床病例记录29-30
• 2.3.3 血涂片染色镜检30
• 2.4 讨论30-34
• 2.4.1 巴贝斯虫的结果分析30-33
• 2.4.2 犬肝簇虫的结果分析33
• 2.4.3 蜱传巴贝斯虫与犬肝簇虫的综合分析33-34
• 2.4.4 伊氏锥虫的结果分析34
• 2.5 本章小结34-36
• 第二章 犬人工接种伊氏锥虫的病程研究36-55
• 3.1 材料与试剂36-37
• 3.1.1 供试动物36
• 3.1.2 实验仪器设备36
• 3.1.3 实验试剂36-37
• 3.1.4 虫体复苏37
• 3.2 实验方法37-39
• 3.2.1 实验动物分组37
• 3.2.2 观察指标37-38
• 3.2.3 病理解剖38
• 3.2.4 病理切片的制作38-39
• 3.2.5 PCR对伊氏锥虫的检测39
• 3.3 结果与分析39-51
• 3.3.1 显微镜观察虫体39-40
• 3.3.2 感染情况与死亡情况40
• 3.3.3 外周血中虫体数的统计40-43
• 3.3.4 临床症状43-45
• 3.3.5 病理解剖45
• 3.3.6 组织病理切片观察45-51
• 3.3.7 PCR对伊氏锥虫的检测51
• 3.4 讨论51-53
• 3.4.1 感染情况51-52
• 3.4.2 外周血中虫体的观察52
• 3.4.3 临床症状52-53
• 3.4.4 病理组织切片53
• 3.4.5 PCR检测53
• 3.5 本章小结53-55
• 第三章 两种药物对犬伊氏锥虫病治疗效果的初探55-64
• 4.1 材料与试剂55
• 4.1.1 供试动物55
• 4.1.2 实验试剂与仪器55
• 4.1.3 实验药物55
• 4.2 实验方法55-56
• 4.2.1 实验动物分组与给药方法55-56
• 4.2.2 观察指标56
• 4.3 结果与分析56-62
• 4.3.1 外周血中虫体的观察56-58
• 4.3.2 临床症状58
• 4.3.3 病理解剖58
• 4.3.4 组织病理切片观察58-62
• 4.3.4 PCR对病原的检测62
• 4.4 讨论62-63
• 4.5 本章小结63-64
• 第四章 全文总结64-65
• 参考文献65-74
• 致谢74-75
• 攻读学位期间发表论文情况75

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