褪黑素刺激对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和分化的影响及机理研究

发布时间：2017-06-14 18:04

  本文关键词：褪黑素刺激对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和分化的影响及机理研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究旨在探讨褪黑素及其受体阻断后对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和分化过程中整合素β1、SOX9、β-catenin、BMP2/4、KAP7、KAP8、K5/14和K1／10十一个基因表达的研究,为内蒙古白绒山羊毛囊干细胞定向增殖及其诱导分化提供相关的理论基础。1.探寻研究褪黑素对毛囊干细胞的最适增殖分化浓度,采用0pg/mL (CG)、 100pg/mL、300pg/mL、500pg/mL、700pg/mL五个浓度梯度对毛囊干细胞连续处理21d,分别提取0d、1d、3d、5d、7d、14d和21d的细胞eDNA为模板采用实时定量PCR方法整合素β1、SOX9、β-catenin、BMP2/4、KAPT、KAPS、K5/14和K1/10十一个基因表达量。结果显示,500pg/mL浓度的褪黑素为毛囊干细胞定向分化为毛囊细胞的最适分化浓度,300pg/mL浓度的褪黑素为毛囊干细胞定向分化为表皮细胞的最适分化浓度,且同时存在整合素β1、SOX9、β-catenin, BMP2/4、KAPT、KAP8、K5/14和K1/10在一定的时间点出现高表达的现象。2。探寻研究褪黑素对毛囊干细胞分化为毛囊细胞膜受体作用,根据第一个实验确定的最适分化浓度,设立Opg/ml、500pg/mL、500pg/mL+4-P-ADOT(MT2阻断剂)、500pg/mL+Luzindole (MT1+MT2阻断剂)四个实验组处理毛囊干细胞,分别提取0d、1d、3d、5d、7d、14d和21d的细胞cDNA为模板采用实时定量PCR方法整合素β1、SOX9、β-catenin、BMP2/4、KAP7、KAP8、K5/14和K1/10十一个基因表达量。结果显示,加入阻断剂组未出现KAP7、KAP8高表达现象,褪黑素作用毛囊干细胞向毛囊细胞分化是通过细胞膜上的受体2调节实现的。
【关键词】：绒山羊 毛囊干细胞 褪黑素 整合素β1 SOX9 β-catenin BMP2/4 KAP7/8 K5/14 K1/10
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-12
• 1 引言12-22
• 1.1 绒山羊的简介12
• 1.2 毛囊的介绍12-14
• 1.2.1 毛囊的结构12
• 1.2.2 毛囊的生长周期12-13
• 1.2.3 毛囊周期性变化的调控因子13-14
• 1.3 毛囊干细胞的介绍14-19
• 1.3.1 毛囊干细胞的概述及特征14-15
• 1.3.2 毛囊干细胞的相关标记物15-16
• 1.3.3 毛囊干细胞定位的研究历程16-17
• 1.3.4 调节毛囊干细胞增殖分化的信号通路17-19
• 1.4 褪黑素19-20
• 1.4.1 褪黑素的研究概况19
• 1.4.2 褪黑素受体的分类和分布19-20
• 1.5 本实验研究的目的和意义20-22
• 2 褪黑素对毛囊干细胞增殖分化浓度的研究22-53
• 2.1 实验材料22
• 2.1.1 实验材料22
• 2.1.2 实验仪器及耗材22
• 2.1.3 实验试剂22
• 2.2 实验方法22-26
• 2.2.1 毛囊干细胞的解冻和复苏22
• 2.2.2 毛囊干细胞的传代培养22-23
• 2.2.3 褪黑素处理毛囊干细胞23
• 2.2.4 细胞总RNA的提取23
• 2.2.5 细胞总RNA的鉴定23
• 2.2.6 荧光定量PCR引物的设计与合成23
• 2.2.7 RT-PCR扩增23-25
• 2.2.8 相对定量PCR检测基因不同组间的表达25-26
• 2.2.9 实验数据的统计分析26
• 2.3 结果与分析26-53
• 2.3.1 细胞总RNA的提取26-27
• 2.3.2 褪黑素刺激后毛囊干细胞形态观察27
• 2.3.3 褪黑素刺激调控毛囊干细胞增殖分化β1-integrin和SOX9基因的确定27-34
• 2.3.4 褪黑素刺激调控于毛囊干细胞增殖分化β-catenin和BMP2/4基因表达的确定34-40
• 2.3.5 褪黑素刺激调控毛囊干细胞增殖分化KAP7和KAP8基因表达确定40-45
• 2.3.6 褪黑素刺激调控毛囊干细胞增殖分化K5/14和K1/10基因表达确定45-53
• 3 褪黑素刺激(受体阻断)调控毛囊干细胞增殖分化浓度相关基因受体的确定53-72
• 3.1 实验材料53
• 3.2 实验方法53
• 3.3 结果与分析53-72
• 3.3.1 细胞总RNA的提取53
• 3.3.2 褪黑素及褪黑素受体阻断后毛囊干细胞形态观察53-54
• 3.3.3 褪黑素刺激(受体阻断)调控毛囊干细胞增殖分化相关基因表达确定54-71
• 3.3.4 结论71-72
• 4 全文总结72-73
• 致谢73-74
• 参考文献74-79
• 附录79-84
• 作者简介84

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 史明艳;高雪;杨学义;窦忠英;;山羊毛囊干细胞分离、培养及鉴定[J];畜牧兽医学报;2008年12期

2 赵奎;贾宗菲;弓慧敏;王振华;王恩峰;庞全海;;毛囊干细胞的分离方法及其应用[J];中国畜牧兽医;2010年12期

3 郭婷婷;张世栋;牛春娥;郭健;孙晓萍;冯瑞林;刘建斌;岳耀敬;杨博辉;;细毛羊毛囊干细胞分离培养方法比较研究[J];中国畜牧兽医;2013年07期

4 史明艳;刘霞;杨学义;窦忠英;;山羊毛囊干细胞的分离及体外培养[J];黑龙江畜牧兽医;2009年11期

5 弓慧敏;庞全海;贾宗菲;弓瑞娟;;毛囊干细胞研究进展[J];中国草食动物;2010年01期

6 史明艳;杨学义;窦忠英;;山羊毛囊干细胞分离培养方法研究[J];畜牧兽医学报;2006年05期

7 史明艳;林峰;杨学义;窦忠英;;不同浓度的EGF对山羊毛囊干细胞体外培养的影响[J];西北农业学报;2009年03期

8 史明艳;高雪;杨学义;窦忠英;;不同浓度的IGF-1对山羊毛囊干细胞体外培养的影响[J];中国畜牧兽医;2009年05期

9 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 华云旗;李秀兰;张杨;郭悦;赵尚昆;;毛囊干细胞的分离、培养方法研究[A];天津市生物医学工程学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年

2 杨鹏高;方勇;;毛囊干细胞的研究及应用进展[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

3 华云旗;李秀兰;张杨;;微环境调控毛囊干细胞增殖与分化的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会2006年学术年会论文摘要集[C];2006年

4 原璐;王春生;安铁洙;;毛囊干细胞研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

5 朱培成;侯志庄;张娴;谢婷;刘维;陈修漾;;中药益发复方含药血清对大鼠毛囊干细胞增殖的调控作用[A];2014全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C];2014年

6 张杨;李秀兰;华云旗;;毛囊细胞的最佳分离及培养条件的研究[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年

7 张群;杨光辉;丛笑倩;崔磊;张文杰;刘伟;曹谊林;;差速贴壁法分选人毛囊干细胞的实验研究[A];中国美容与整形医师大会论文汇编[C];2005年

8 耿松梅;谭升顺;;毛囊干细胞与皮肤重建[A];2006中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2006年

9 姜自玲;杨柯;杨力;杨恬;;Pax6在毛囊干细胞向角膜上皮细胞诱导转分化中量的变化及其可能作用[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年

10 王洪涛;陈璧;;毛囊干细胞参与创面修复及相关的信号转导通路[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前6条

1 记者 李天舒 通讯员 方红娟;我学者从一根毛囊上获大量干细胞[N];健康报;2012年

2 陈勇;毛囊干细胞可望治愈神经损伤[N];医药经济报;2005年

3 ;毛囊干细胞自发生成毛囊毛发[N];新华每日电讯;2004年

4 ;治疗脱发新希望[N];人民日报;2004年

5 李学华;美成功利用头发毛囊干细胞制备血管和皮肤[N];科技日报;2008年

6 毛磊;毛囊干细胞移植有望使毛发再生[N];中国医药报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王旭升;Ly6c巨噬细胞通过AKT信号影响Lgr5毛囊干细胞再生的研究[D];清华大学;2015年

2 乃门塔娜;阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞的分离鉴定及转录因子Sox9对其作用机理的研究[D];内蒙古大学;2016年

3 邢书亮;毛囊干细胞向上皮细胞分化及其相关调控信号的初步研究[D];复旦大学;2007年

4 张艺;β-catenin在毛囊干细胞增殖与分化中作用的初步研究[D];第三军医大学;2008年

5 木拉提·热夏提;毛囊干细胞和异种脱细胞支架复合培养方法及组织相容性研究[D];新疆医科大学;2014年

6 史明艳;山羊毛囊干细胞构建毛囊化组织工程皮肤研究[D];中国农业科学院;2012年

7 彭文标;毛囊干细胞构建组织工程尿道的实验研究[D];南方医科大学;2013年

8 周s，

本文编号：450130