内蒙古蓝舌病与鹿流行性出血热流行病学调查及相关虫媒鉴定

发布时间：2017-06-15 11:07

  本文关键词：内蒙古蓝舌病与鹿流行性出血热流行病学调查及相关虫媒鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了了解近年来内蒙古地区蓝舌病流行情况、主要传播媒介库蠓的种类、内蒙古地区蓝舌病和鹿流行性出血热的主要流行的血清型。本研究通过竞争ELISA方法检测2013～2015年连续3年随机采集的内蒙古11个地区的不同种动物血清样品,进行蓝舌病流行病学趋势调查。选择抑制率≥60%的样品进行病毒抗体中和实验,确定蓝舌病、鹿流行性出血热的主要流行血清型。持续对监控点的监控动物进行蓝舌病血清学监测,取转阳动物转阳当周、转阳前两周及后两周的EDTA抗凝血经鸡胚接种、C6/36细胞与BHK-21细胞接种的方法进行病毒的分离,通过抗原捕获ELISA方法、RT-PCR方法、Real-time PCR方法检测病毒分离情况。实验结果显示,2013年内蒙古地区家饲反刍兽的蓝舌病总阳性率为10.82%；2014年内蒙古地区家饲反刍兽的蓝舌病总阳性率为11.75%,其中绵羊阳性率为8.76%、山羊阳性率为8%、牛阳性率为23%；2015年内蒙古地区家饲反刍兽的蓝舌病总阳性率为11.27%,其中绵羊阳性率为10.25%、山羊阳性率为15.56%、牛的阳性率0%；2015年鹿流行性出血热的总阳性率为1.43%,其中绵羊阳性率为2.46%、山羊阳性率为1.15%、牛阳性率为0%。全区连续3年蓝舌病的阳性率维持在10%-12%,变化不大,但有增长的趋势。2015年麇鹿、鹿、黄羊、岩羊、狍子等野生反刍兽的蓝舌病阳性率为3.67%,野生反刍兽的阳性率低于家饲反刍兽的阳性率,其中仅黄羊、岩羊、麇鹿三种动物检测到蓝舌病抗体阳性个体,羊种野生动物较其他种野生动物易感。内蒙古地区蓝舌病的主要流行血清型是7型、10型、23型,鹿流行性出血热的主要流行血清型是6型。通过经典的病毒分离方法分离蓝舌病病毒后,经抗原捕获ELISA方法、Real-time PCR方法检测鸡胚肝脏结果均为阳性,未出现细胞病变的细胞液经抗原捕获ELISA方法检测为阴性、Real-time RT-PCR方法检测中检测到了病毒核酸片段。形态学方法与分子生物学方法相结合,可以确定的内蒙古地区存在的库蠓种类,主要有刺螯库蠓、环斑库蠓、残肢库蠓。多种方法检测结果表明,蓝舌病在我省流行分布情况为东西范围广、南北跨度大,以感染家饲反刍兽为主。了解我区蓝舌病、鹿流行性出血热的流行分布情况,对预防、控制这两种病毒的传播扩散有重要意义。
【关键词】：蓝舌病 鹿流行性出血热 流行病学调查 竞争ELISA 抗原捕获ELISA 病毒抗体中和实验 RT-PCR Real-time PCR
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S855.3
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-12
• 1 引言12-24
• 1.1 蓝舌病12-17
• 1.1.1 流行分布情况12-13
• 1.1.2 病原学13-14
• 1.1.3 发病机理及传播途径14-15
• 1.1.4 易感动物与临床症状15-17
• 1.2 鹿流行性出血热17-20
• 1.2.1 流行分布17-18
• 1.2.2 病原学18-19
• 1.2.3 致病机制19
• 1.2.4 易感动物及临床症状19-20
• 1.3 主要传播媒介——库蠓20-21
• 1.4 诊断技术21-22
• 1.5 疫苗研究22-24
• 2 内蒙古地区BTV及EHDV流行病学调查24-34
• 2.1 材料24-26
• 2.1.1 标准对照样品及检测样品来源24-25
• 2.1.2 主要试剂25
• 2.1.3 耗材与设备25-26
• 2.2 方法26-28
• 2.2.1 BTV C-ELISA方法26
• 2.2.2 EHDV C-ELISA方法26-28
• 2.3 结果28-33
• 2.3.1 2013～2015年内蒙古地区BT流行趋势28
• 2.3.2 2015年内蒙古各地区BT和EHD阳性率统计28-30
• 2.3.3 2015年内蒙古不同种动物BT与EHD阳性率统计30-31
• 2.3.4 2015年内蒙古地区野生反刍兽BT与EHD阳性率统计31-33
• 2.4 讨论33-34
• 3 内蒙古地区BTV及EHDV血清型鉴定34-38
• 3.1 材料34
• 3.1.1 检测样品来源34
• 3.1.2 主要试剂34
• 3.1.3 设备与耗材34
• 3.2 方法34-36
• 3.2.1 标准病毒毒价的滴定34-35
• 3.2.2 细胞浓度、代数、状态对中和实验的影响35
• 3.2.3 内蒙古地区BTV、EHDV血清型鉴定35-36
• 3.3 结果36-37
• 3.3.1 细胞浓度、代数及生长状态对抗体中和实验的影响36
• 3.3.2 内蒙古地区BTV与EHDV主要流行血清型及其分布36-37
• 3.4 讨论37-38
• 4 内蒙古地区BTV的初步分离38-54
• 4.1 材料38
• 4.1.1 检测样品来源38
• 4.1.2 主要试剂38
• 4.1.3 主要设备与耗材38
• 4.2 方法38-44
• 4.2.1 C-ELISA检测方法38
• 4.2.2 BTV Real-time RT-PCR方法检测EDTA抗凝血38-40
• 4.2.3 鸡胚接种40-41
• 4.2.4 抗原捕获ELISA方法检测鸡胚肝脏41-42
• 4.2.5 BTV Real-time RT-PCR方法检测鸡胚肝脏样品42
• 4.2.6 细胞接种42-43
• 4.2.7 AC-ELISA方法检测细胞培养液43
• 4.2.8 BTV Real-time RT-PCR方法检测细胞培养液43
• 4.2.9 BTV RT-PCR方法检测细胞培养液43-44
• 4.3 结果44-52
• 4.3.1 C-ELISA方法监测监控动物抑制率结果44-45
• 4.3.2 监控动物血液Real-time RT-PCR方法检测结果45-46
• 4.3.3 鸡胚死亡病变46-47
• 4.3.4 鸡胚肝脏AC-ELISA检测结果47-48
• 4.3.5 鸡胚肝脏BTV Real-time RT-PCR方法检测结果48-49
• 4.3.6 细胞接种49-50
• 4.3.7 细胞培养液中BTV的AC-ELISA检测结果50
• 4.3.8 细胞培养液的BTV Real-time RT-PCR方法检测结果50-51
• 4.3.9 细胞培养液BTV RT-PCR方法检测51-52
• 4.4 讨论52-54
• 5 库蠓形态学与分子生物学鉴定54-71
• 5.1 材料54
• 5.1.1 样品来源54
• 5.1.2 主要试剂54
• 5.1.3 设备和耗材54
• 5.2 方法54-56
• 5.2.1 库蠓的收集与保存54
• 5.2.2 库蠓形态学方法鉴定54-55
• 5.2.3 库蠓分子生物学方法鉴定55-56
• 5.3 结果56-69
• 5.3.1 库蠓粗分类统计56-57
• 5.3.2 库蠓形态学方法鉴定结果57-62
• 5.3.3 库蠓分子生物学方法鉴定结果62-68
• 5.3.4 形态学方法与分子生物学方法比较68-69
• 5.4 讨论69-71
• 6 结论71-72
• 致谢72-73
• 参考文献73-79
• 作者简介79

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本文编号：452263