莱菔硫烷对镉暴露小鼠睾丸支持细胞保护机制的研究

发布时间：2017-06-20 05:07

  本文关键词：莱菔硫烷对镉暴露小鼠睾丸支持细胞保护机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的：镉污染严重威胁着人类和动植物的健康,镉(Cd)慢性中毒已成为影响家畜繁殖障碍的重要原因之一,其诱导睾丸细胞凋亡的主要原因是产生活性氧(ROS),从而引起细胞膜的脂质过氧化损伤。Nrf2抗氧化反应的信号可以由抗氧化剂化合物莱菔硫烷(SFN)诱导。本试验旨在研究莱菔硫烷能否通过Nrf2-ARE通路来保护镉造成的小鼠睾丸支持细胞的损伤,无疑为对抗镉导致的生殖细胞的氧化损伤的治疗提供了新思路,为临床防治镉中毒疾病提供理论参考。方法：用不同浓度的SFN和CdCl2单独或联合处理小鼠睾丸支持细胞,MTT法检测其存活率；比色法检测其MDA含量及LDH、SOD活性；AO/EB双染色法和流式细胞术检测其凋亡率；qPCR和Western blot方法分别检测其Nrf2及其调控的GSH-PX、HO-1、γ-GCS、 NQO1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：1. CdCl2可降低细胞的存活率,低浓度的SFN能使细胞的存活率升高；2. CdCl2使细胞的LDH活性上升p0.01)、SOD活性降低p0.05)、MDA含量升高(P0.05),SFN能使染CdCl2细胞的LDH活性降低p0.01)、SOD活性升高(P0.01)、MDA含量明显下降p0.01)；3.CdCl2诱发睾丸支持细胞凋亡率显著增加(P0.01),SFN能抑制CdCl2诱导的支持细胞的凋亡p0.01)；4. CdCl2降低NrF2及其调控的下游靶基因的mRNA和蛋白的表达水平p0.01,p0.05),SFN提高了CdCl2处理的睾丸支持细胞Nrf2及其调控的下游靶基因的mRNA和蛋白的表达量p0.01,p0.05)。结论：莱菔硫烷对镉暴露导致的细胞氧化损伤、凋亡具有保护作用；能通过激活Nrf2-ARE路径,上调其下游的抗氧化和解毒酶的表达水平来拮抗镉对细胞造成的损伤。
【关键词】：氯化镉 莱菔硫烷 支持细胞 Nrf2-ARE通路
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 摘要10-11
• Abstract11-12
• 前言12-18
• 1 镉的概述12-14
• 1.1 镉的生殖毒性作用的研究12-13
• 1.2 镉拮抗剂的研究现状13-14
• 2 莱菔硫烷14-15
• 2.1 抗肿瘤作用14
• 2.2 保护脑和神经的作用14-15
• 2.3 抗氧化作用15
• 2.4 免疫抗炎作用15
• 3 Nrf2-Keap1/ARE信号通路15-17
• 3.1 转录因子核相关因子E2相关因子2(Nrf2)简介及相关作用16
• 3.2 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)简介及相关作用16-17
• 4 本试验的目的与意义17-18
• 试验一 小鼠原代睾丸支持细胞体外培养模型的建立18-26
• 1 试验材料18-19
• 1.1 试验动物18
• 1.2 主要器材18
• 1.3 主要试剂及配制18-19
• 2 试验方法19-21
• 2.1 小鼠睾丸支持细胞的分离、培养和纯化19-20
• 2.2 小鼠睾丸支持细胞的鉴定20-21
• 2.2.1 油红O染色鉴定20
• 2.2.2 Feulgen染色鉴定20
• 2.2.3 FasL免疫组化鉴定20-21
• 3 结果与分析21-24
• 3.1 支持细胞形态学观察21-22
• 3.2 油红O染色鉴定结果22
• 3.3 Feulgen染色鉴定结果22-23
• 3.4 FasL免疫组化鉴定结果23-24
• 4 讨论24-25
• 5 小结25-26
• 试验二 莱菔硫烷对染镉小鼠睾丸支持细胞的保护作用及机制的研究26-59
• 1 试验材料26-30
• 1.1 试验动物26
• 1.2 主要器材26-27
• 1.3 主要试剂及配制27-30
• 2 试验方法30-41
• 2.1 氯化镉染毒和莱菔硫烷解毒模型的建立30-31
• 2.2 支持细胞活性的检测31
• 2.3 支持细胞凋亡的检测31-32
• 2.4 支持细胞氧化损伤的检测32-33
• 2.5 支持细胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS及NQO1基因mRNA的表达水平检测33-38
• 2.6 支持细胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS、NQO1蛋白表达水平的检测38-41
• 2.7 数据的统计与分析41
• 3 结果与分析41-55
• 3.1 氯化镉和莱菔硫烷处理的支持细胞存活率的检测结果41-46
• 3.2 支持细胞活性检测结果46
• 3.3 支持细胞凋亡检测结果46-49
• 3.4 支持细胞氧化损伤的检测结果49
• 3.5 GSH-PX、Nrf2、HO-1、γ-GCS、NQO1及内参引物的特异性检测结果49-50
• 3.6 支持细胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS、NQO1及内参基因qPCR引物的特异性及标准曲线的结果分析50
• 3.7 支持细胞Nrf2、GSH-PX、HO-1、γ-GCS及NQO1 mRNA和蛋白表达水平50-55
• 4 讨论55-58
• 5 小结58-59
• 结论59-60
• 参考文献60-67
• 附录67-74
• 致谢74-75
• 攻读硕士研究生期间发表的文章75

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  本文关键词：莱菔硫烷对镉暴露小鼠睾丸支持细胞保护机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

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