禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2017-06-26 19:15

  本文关键词：禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】建立禽坦布苏病毒(Avian Tembusu virus,ATmV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据ATmV非结构蛋白NS1的基因特征,设计特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和之前建立的RT-PCR方法同时对临床15份疑似ATmV感染的病料进行检测,计算其符合率。【结果】成功建立了检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,当NS1基因含量为(2.67×102)~(2.67×107)拷贝/μL时有良好的线性扩增,其扩增相关系数为0.998,扩增效率为99.9%。建立的ATmV实时荧光定量PCR检测方法敏感度高,最低检测限为2.67×102拷贝/μL;特异性强,对水禽常见病毒(如Ⅰ型鸭肝炎病毒、新型鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、禽Ⅰ型副粘病毒与番鸭细小病毒等)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.39%~1.17%和0.51%~1.82%。对临床送检的15份病料,TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的阳性率为73.33%(11/15),RTPCR方法的阳性率为60.0%(9/15),2种方法的符合率为100.0%。【结论】建立了基于TaqMan探针的ATmV实时荧光定量PCR检测方法,该方法可应用于ATmV感染的早期检测。
【作者单位】： 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心;
【关键词】： 禽坦布苏病毒 NS基因 TaqMan 实时荧光定量PCR方法
【基金】：国家现代水禽产业体系项目(CARS-43) 福建省属公益类项目(2015R1023-7) 福建省农业科学院“青年科技英才百人计划”项目(YC2015-12);福建省农业科学院青年人才创新基金项目(2014QA-7)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 自2010年春季以来,我国南方种(蛋)鸭养殖厂发生一种以产蛋率急剧下降甚至停产为典型特征的鸭新发传染病,临床剖检病变主要为卵巢发育不良,卵泡变性、出血或破裂。该病在不同地区、不同品种鸭群发病率高低不一,群内发病率几乎为100%,病死率为0~12%。国内多家科研单位开展联合攻

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