肠炎沙门氏菌诱导鸡卵巢免疫反应的研究
本文关键词：肠炎沙门氏菌诱导鸡卵巢免疫反应的研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：鸡的生殖道末端开口于泄殖腔,因此易受泄殖腔处排泄物和环境中病原微生物感染,从而引起生殖功能异常以及鸡蛋的污染。肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)作为禽类养殖业中主要的病原体,不仅会对禽类肠道进行感染,同时也可以入侵鸡的生殖道引发生殖道疾病。同时SE作为人类食源性疾病的主要病原菌可以通过感染鸡蛋或鸡肉等食物从而威胁人类健康。卵泡的生长发育会直接影响鸡的产蛋性能和鸡蛋的品质,而卵巢不但作为卵泡生长和发育场所,还会对蛋鸡感染SE后的抵抗起着至关重要作用。本实验通过两种方式(口服和泄殖腔注射SE)对45周龄蛋鸡接种SE,随后通过HE染色方法、SP免疫组化法和SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测蛋鸡接种SE后1d、4d、7d、10d和14d时卵巢组织发育变化情况以及卵巢内CD3、CD4、CD8和Bu-1+淋巴细胞分布变化及数量动态变化和卵巢内TLR3、TLR4、TLR7、TLR21、IL-6和iNOS mRNA表达动态变化情况。通过HE染色技术检测到口服SE组蛋鸡卵巢间质和卵泡膜上白细胞数量会增多,而泄殖腔注射SE组蛋鸡卵巢内除了有间质和卵泡膜白细胞增多外,还会出现血管充血或出血现象。SP免疫组化实验检测到口服SE组蛋鸡卵巢内CD3+细胞在1-14d时数量逐渐增多直到14d达最高峰,且每个日龄都高于对照组,阳性细胞主要分布于卵巢间质。泄殖腔注射SE组蛋鸡卵巢内CD3+细胞在1-10d时数量越来越多,10d达最大值且此时期极显著高于对照组。CD4+T淋巴细胞在数量变化上并没有太大幅度的改变,口服SE组蛋鸡接种SE后10d数量达最高峰,而泄殖腔注射SE组蛋鸡接种SE后4d时数量就到达最高峰,少量阳性细胞分布于卵巢间质和髓质内。两个实验组内CD8+T淋巴细胞数量均是在10d达到最大值,且这种细胞主要分布于卵泡膜和间质中,同时也会在髓质内也分布,只是阳性细胞数量并没有卵泡膜和间质中阳性细胞数量多。Bu-1+淋巴细胞与T淋巴细胞相比从接种后1-14d其数量一直都较少,但相比于对照组,实验组蛋鸡卵巢内Bu-1+淋巴细胞几乎都会高于对照组。通过SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测到口服SE组蛋鸡卵巢内TLR3 mRNA相对表达量在10d达最大值且显著高于对照组;TLR4、TLR21和IL-6 mRNA相对表达量在7d达最大值,但只有IL-6 mRNA含量在7d时显著高于对照组;TLR7 mRNA表达量与对照组差异不显著。泄殖腔注射SE组蛋鸡卵巢内TLR3 mRNA的相对表达量在4d时达最大值,随后逐渐减少至14d时表达量又进一步增多,TLR7和IL-6 mRNA的表达在10d时达最高峰且都显著高于对照组,TLR4和TLR21 mRNA表达变化差异不显著,iNOS mRNA的表达量与口服SE组类似,只有在接种后的第1d表达量最多随后减少,与对照组相比差异不显著。以上结果表明,分别通过口服和泄殖腔注射方式对蛋鸡接种SE,口服和泄殖腔注射SE均可引起蛋鸡卵巢组织结构发生变化,同时引起卵巢内T和B淋巴细胞分布和数量发生改变,但是与Bu-1+细胞相比,CD3、CD4和CD8阳性细胞数量要明显更多,说明接种SE引起蛋鸡卵巢产生的免疫反应更倾向于细胞免疫应答。接种方式的不同可以引起天然免疫因子mRNA含量和淋巴细胞数量及分布情况不同,证明接种方式对免疫效果有一定的影响,相比于口服SE泄殖腔注射SE效果要更为明显。两个实验组蛋鸡卵巢内都会有天然免疫细胞因子mRNA的表达量增加,证明SE可诱导蛋鸡卵巢产生天然免疫应答,但是两个实验组内TLRs mRNA的表达变化情况不同,相比于口服SE组,泄殖腔注射组卵巢内TLRs mRNA表达量相对较高。
【关键词】：蛋鸡 卵巢 SE 细胞因子 淋巴细胞
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：
- 摘要4-6
- Abstract6-9
- 第一章 前言9-16
- 1.1 研究目的与意义9-10
- 1.2 文献综述10-16
- 第二章 蛋鸡接种SE后卵巢组织结构观察16-22
- 2.1 材料和方法16-18
- 2.2 结果与分析18-21
- 2.3 讨论21
- 2.4 小结21-22
- 第三章 蛋鸡接种SE后卵巢内T淋巴细胞和Bu-1+淋巴细胞变化检测22-35
- 3.1 材料和方法22-23
- 3.2 结果与分析23-32
- 3.3 讨论32-33
- 3.4 小结33-35
- 第四章 蛋鸡接种SE后卵巢中细胞因子表达的检测35-49
- 4.1 材料和方法35-39
- 4.2 结果与分析39-46
- 4.3 讨论46-48
- 4.4 小结48-49
- 结论49-50
- 参考文献50-57
- 附录57-58
- 作者简介58-59
- 致谢59
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