副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株的构建与鉴定

发布时间：2017-06-26 20:08

  本文关键词：副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株的构建与鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为构建副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株,以副猪嗜血杆菌S2261基因组为模板扩增Hfq基因的上、下游同源臂,用融合PCR的方法融合拼接两条同源臂。以Eco RⅠ+HindⅢ分别对融合片段与p K18mobSac B质粒进行双酶切并用T4 DNA连接酶连接以构建同源重组质粒p K18mob Sac B-Hfq-ud。以大肠杆菌S17-1-pir作为供体菌,副猪嗜血杆菌S2261作为受体菌,通过接合转移法成功构建了副猪嗜血杆菌Hfq基因缺失株。绘制了S2261野生株与Hfq缺失株的生长曲线以及测定了LD50,结果显示,相比于S2261野生株,Hfq缺失株在对数期的生长速度下降;S2261野生株与Hfq缺失株的LD50分别为2.9×108与3.16×1010CFU,这说明相比野生株,Hfq缺失株导致小鼠半数死亡所需的剂量显著升高,相对的其毒力则明显下降。药敏试验结果显示,Hfq缺失株对氧氟沙星和诺氟沙星的敏感性明显增加。以上结果说明在副猪嗜血杆菌中,Hfq基因对该菌的生长速度、毒力以及药物敏感性具有调控作用。这为副猪嗜血杆菌Hfq基因功能以及该菌相关的疫苗研究奠定了基础。
【作者单位】： 四川农业大学动物医学院;动物疫病与人类健康四川省重点实验室;
【关键词】： 副猪嗜血杆菌 Hfq基因 基因缺失 接合转移
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划项目(2013BAD12B04)
【分类号】：S852.61
【正文快照】： 引物名称Primer names引物序列(5'→3')Primer sequencs酶切位点Restriction site目的片段的大小/bpLengthHfqu-F CGGAATTCCGAGCGGATCAACCCTAATGAT Eco RⅠ545Hfqu-R CGGGGACCATGCTCTCTGAGCTTTATGTTCCTTCTAATTHfqd-F GCTCAGAGAGCATGGTCCCCGTTTTATTACTACGTTAGACCT514Hfqd-R CCC

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