不同脂肪酸对下丘脑N38细胞AgRP表达和分泌的影响及其信号通路

发布时间：2017-07-02 08:02

  本文关键词：不同脂肪酸对下丘脑N38细胞AgRP表达和分泌的影响及其信号通路，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：采食量是影响动物生产性能的重要因素之一。目前认为,下丘脑食欲中枢的信号整合在“食欲调控网络”中扮演着重要的作用。下丘脑弓状核促采食神经元能够感应营养物质如葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等浓度的变化,从而刺激AgRP蛋白的表达和分泌,参与控制采食和能量平衡。迄今为止,不同脂肪酸对动物采食调控的影响及其机制还不是很清楚。为此,本研究在细胞水平上,以小鼠下丘脑N38细胞为模型,采用Western Blot技术检测不同脂肪酸作用下AgRP蛋白的表达及分泌情况,采用定量PCR技术检测AgRP、CD36以及代谢相关基因mRNA的表达水平,并采用RNA干扰和受体激动剂处理等方法研究和比较不同脂肪酸对炎症信号通路及胰岛素、瘦素信号通路变化的影响。研究结果如下:(1)不同的脂肪酸对N38细胞AgRP的表达和分泌具有不同的影响。其中,100μM的丁酸及油酸、棕榈酸对N38细胞AgRP的表达和分泌无显著影响;而100μM月桂酸、辛酸以及硬脂酸、肉豆蔻酸能够显著促进AgRP蛋白的表达和分泌(P0.05);而100μM的亚油酸能够抑制AgRP蛋白的表达及分泌(P0.05)。(2)10μM和50μM的亚油酸能显著抑制N38细胞AgRP蛋白的分泌,当浓度增加到100及300μM时,还能够显著抑制AgRP蛋白的表达(P0.05);硬脂酸及月桂酸在10、50及100μM均能显著促进AgRP蛋白的表达和分泌(P0.05)。(3)100μM亚油酸与LPS共处理后,显著逆转了TLR4蛋白及TLR4依赖的炎症通路蛋白JNK/IKKα/β的抑制效应(P0.05);干扰TLR4后,硬脂酸显著逆转了蛋白TLR4及TLR4依赖的JNK蛋白的表达;而月桂酸也能够逆转TLR4及IKKα/β的促进效应(P0.05)。表明TLR4通路参与介导了上述脂肪酸对N38细胞AgRP表达和分泌的调节作用。(4)100μM亚油酸能显著增加N38细胞胰岛素及瘦素通路的敏感性(P0.05),与LPS共处理后,胰岛素及瘦素通路的敏感性降低,从而逆转了AgRP的抑制作用;而100μM的硬脂酸能显著抑制胰岛素及瘦素信号通路(P0.05),干扰TLR4受体后,显著逆转了IRS/Akt/Fox O1及JAK2/STAT3蛋白降低的效应(P0.05),从而抑制了AgRP蛋白的促进作用;100μM月桂酸对胰岛素及瘦素通路无显著影响。(5)100μM的亚油酸能够显著降低代谢相关基因CPT1/FAS的表达量,而显著增加CD36 mRNA的表达量(P0.05);硬脂酸能够显著增加CPT1/FAS及CD36的表达量(P0.05);100μM的月桂酸对ACCα/FAS/CPT1/UCP2及CD36的表达量均无显著影响。综上所述,不饱和脂肪酸——亚油酸能够TLR4依赖性地抑制炎症通路蛋白的表达,促进胰岛素及瘦素的敏感性,从而降低AgRP蛋白的表达及分泌;而饱和脂肪酸——硬脂酸及月桂酸则通过TLR4介导,促进炎症通路蛋白的表达,抑制胰岛素及瘦素的敏感性,从而增加AgRP的表达及分泌。同时,亚油酸及硬脂酸也可能通过CD36及代谢通路影响AgRP神经元的活性。
【关键词】：采食调控 炎症 亚油酸 硬脂酸 月桂酸
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-19
• 1.1 下丘脑采食调控相关神经元对采食的影响11-12
• 1.2 脂肪酸对动物采食的影响12-13
• 1.3 脂肪酸影响采食调控的作用机制13-18
• 1.3.1 脂肪酸转运体及脂肪酸能量代谢机制14-15
• 1.3.2 脂肪酸受体15-16
• 1.3.3 TLR4介导的炎症信号通路16-18
• 1.4 研究目的与意义18-19
• 2 材料与方法19-29
• 2.1 材料19-22
• 2.1.1 主要仪器与设备19
• 2.1.2 试验用品及耗材19
• 2.1.3 主要试剂19-20
• 2.1.4 试验用品的清洗及消毒20
• 2.1.5 主要试剂的配制20-22
• 2.1.6 试验细胞22
• 2.2 试验方法22-29
• 2.2.1 N38细胞的复苏及培养22-23
• 2.2.2 N38细胞的处理23
• 2.2.3 细胞内总蛋白的测定23-24
• 2.2.4 细胞上清的处理24
• 2.2.5 Western Blot检测24-26
• 2.2.6 N38细胞总RNA的提取、反转录及PCR扩增26-29
• 2.3 数据统计29
• 3 结果与分析29-39
• 3.1 不同脂肪酸对N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的影响29-30
• 3.2 亚油酸及硬脂酸对N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的剂量效应30-31
• 3.3 亚油酸及硬脂酸调节N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的作用机制31-36
• 3.3.1 亚油酸及硬脂酸对N38细胞炎症通路相关蛋白表达的影响31-32
• 3.3.2 亚油酸通过抑制TLR4依赖的炎症通路来降低N38细胞AgRP的表达和分泌32
• 3.3.3 硬脂酸通过促进TLR4依赖的炎症通路来增加N38细胞AgRP的表达和分泌32-34
• 3.3.4 亚油酸及硬脂酸对胰岛素、瘦素通路蛋白表达的影响34-36
• 3.4 月桂酸对N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的影响36-38
• 3.4.1 月桂酸对N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的剂量效应36
• 3.4.2 月桂酸对N38细胞炎症通路相关蛋白表达的影响36-37
• 3.4.3 月桂酸通过促进TLR4依赖的炎症通路来增加N38细胞AgRP的表达和分泌37
• 3.4.4 月桂酸对胰岛素、瘦素通路蛋白表达的影响37-38
• 3.5 亚油酸、硬脂酸及月桂酸对脂肪酸代谢相关基因mRNA表达的影响38-39
• 4 讨论与结论39-45
• 4.1 脂肪酸对下丘脑N38细胞AgRP蛋白表达及分泌的影响39-40
• 4.2 脂肪酸对下丘脑N38细胞食欲调控的影响及其作用机制40-42
• 4.2.1 TLR4介导的炎症通路40-41
• 4.2.2 胰岛素及瘦素信号通路41-42
• 4.3 脂肪酸转运体及脂肪酸代谢对下丘脑N38细胞食欲调控的影响42-44
• 4.4 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 Songbo Wang;Paul Khondowe;Shengfeng Chen;Jianjian Yu;Gang Shu;Xiaotong Zhu;Lina Wang;Ping Gao;Qianyun Xi;Yongliang Zhang;Qingyan Jiang;;Effects of “Bioactive” amino acids leucine, glutamate, arginine and tryptophan on feed intake and mRNA expression of relative neuropeptides in broiler chicks[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2012年04期

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3 Praveen K Roy;Farzana Rashid;Jack Bragg;Jamal A Ibdah;;Role of the JNK signal transduction pathway in inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2008年02期

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本文编号：509040