J亚群禽白血病病毒对三种不同地方品系鸡的致病性分析

发布时间：2017-07-19 22:04

  本文关键词：J亚群禽白血病病毒对三种不同地方品系鸡的致病性分析

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【摘要】：禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)是第一个被证实可诱发肿瘤的病毒。根据病毒与宿主细胞特异性相关的囊膜蛋白的抗原性,ALV可分为A-J十个亚群,以及新鉴定的K亚群。其中,J亚群ALV(ALV-J)是我国主要的感染亚群,并已蔓延至我国多种遗传背景的纯地方品系鸡群中。不同品系鸡由于具有不同的遗传基础,因而对ALV的易感性差异很大,国外关于ALV遗传抗性的研究已有大量报道。我国是世界上畜禽资源最丰富的国家之一,许多优良地方品种具有国外家禽品种所不及的优良性状,这些优良性状是抗病育种的宝贵素材。我们有必要充分利用我国地方品系鸡资源,发现抗病力较强的品系,筛选与ALV抗性相关的基因,从而为抗ALV新品系的培育奠定坚实基础。此外,弱毒疫苗中ALV外源污染是ALV传播的一个重要原因,为此,针对弱毒疫苗中ALV污染的检测,我们研究比较了核酸检测与抗体检测在接种SPF鸡检测弱毒疫苗中ALV污染时的应用1.三种中国不同地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒NX0101株易感性的比较为了研究不同中国地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的易感性和抵抗力,将ALV-J中国分离株NX0101分别通过鸡胚静脉和卵黄囊两种接种方式接种莱芜黑鸡,汶上芦花鸡,济宁百日鸡三种不同地方品系鸡,分析比较NX0101株对三种品系鸡的致病性。结果表明,NX0101株均可诱发三种品系鸡的髓样细胞瘤,并引起生长迟缓和免疫抑制等亚临床症状,但致病性的强度存在显著差异。在两种不同接种方式下,莱芜黑鸡的死亡率和肿瘤发生率均明显低于另外两个品系,并且感染莱芜黑鸡的体重受抑制程度最低。济宁百日鸡对NX0101株的抵抗力在这三种品系鸡中最弱。因此,莱芜黑鸡可以作为ALV-J遗传抗性基因筛选和抗病育种的候选品系。2.核酸检测与抗体检测在SPF鸡检测弱毒疫苗中ALV污染时的应用及其比较本研究对SPF鸡检查法在检测弱毒疫苗中低剂量ALV污染时核酸检测和抗体检测进行了比较。将定量好的ALV-A以10TCID50/羽份和5TCID50/羽份两种剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(ND)活疫苗,将污染两个不同剂量ALV-A的ND疫苗各接种10只SPF鸡,以ELISA定期检测针对ALV的抗体并利用PCR结合核酸斑点杂交检测血液中ALV核酸,结果显示在免疫污染疫苗后连续三周内ALV抗体全部为阴性,而核酸检测自免疫后两周开始就出现阳性,提示我们在利用经典的SPF鸡检查法检测弱毒疫苗中ALV污染时,通过结合对病原核酸的检测来综合判定有助于节省检测时间和降低漏检率。
【关键词】：禽白血病病毒 地方品系鸡 易感性 遗传抗性 弱毒疫苗 污染
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 符号说明5-10
• 中文摘要10-12
• Abstract12-14
• 1 前言14-23
• 1.1 禽白血病的研究进展14-15
• 1.2 禽白血病病毒的形态学和理化特征15-16
• 1.3 禽白血病病毒的基因组和蛋白质组成16
• 1.4 禽白血病病毒的流行特点和传播途径16
• 1.5 禽白血病病毒的致病性16-17
• 1.6 禽白血病病毒的致瘤机制17
• 1.7 感染ALV后鸡群的免疫反应17-18
• 1.8 ALV-J是我国鸡群中最主要的流行亚群18-19
• 1.8.1 白羽肉鸡中的ALV-J18
• 1.8.2 地方品系鸡和黄羽肉鸡中的ALV-J18
• 1.8.3 蛋用型鸡中的ALV-J18-19
• 1.9 禽白血病的诊断19-20
• 1.10 我国鸡群中ALV高发的流行病学因素20-21
• 1.11 禽白血病的预防和控制21-23
• 2 材料和方法23-35
• 2.1 试验材料23-24
• 2.1.1 试验动物与SPF饲养设施23
• 2.1.2 疫苗23
• 2.1.3 毒株和细胞23
• 2.1.4 主要仪器和试剂23-24
• 2.1.5 其他试剂的配制24
• 2.2 常规试验操作方法24-35
• 2.2.1 三种中国不同地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒NX0101株易感性的比较24-33
• 2.2.1.1 J亚群禽白血病病毒NX0101株的培养24
• 2.2.1.2 细胞上清 P27 的检测24-25
• 2.2.1.3 间接免疫荧光试验25-26
• 2.2.1.4 病毒定量26
• 2.2.1.5 动物实验分组与处理26-27
• 2.2.1.6 不同品系鸡的病毒分离与鉴定27-31
• 2.2.1.6.1 细胞上清 RNA 的提取27-28
• 2.2.1.6.2 感染细胞DNA的提取28-29
• 2.2.1.6.3 斑点杂交29-30
• 2.2.1.6.4 品系鸡的母源抗体检测30-31
• 2.2.1.7 不同地方品系鸡ALV-J病毒血症与抗体动态变化31
• 2.2.1.8 对NDV和AIV-H9灭活疫苗免疫后抗体产生的抑制作用31-32
• 2.2.1.9 死亡鸡的剖检观察及记录32-33
• 2.2.1.10 统计学分析33
• 2.2.2 核酸检测与抗体检测在SPF鸡检测弱毒疫苗中ALV污染时的应用及其比较33-35
• 2.2.2.1 毒株的增殖与定量33
• 2.2.2.2 人工模拟实验的设计33
• 2.2.2.3 不同组别ALV抗体的检测33
• 2.2.2.4 核酸斑点杂交检测SPF鸡血液中ALV核酸33-35
• 3. 试验结果35-45
• 3.1 三种中国不同地方品系鸡对J亚群禽白血病病毒NX0101株易感性的比较35-42
• 3.1.1 J亚群禽白血病病毒NX0101株的培养与鉴定35
• 3.1.2 ALV-J NX0101毒株的病毒定量35
• 3.1.3 品系鸡病毒分离与鉴定35-37
• 3.1.4 不同地方品系鸡ALV-J病毒血症与抗体动态变化37
• 3.1.5 体重与胸腺、脾脏、法氏囊重比例的测定37-39
• 3.1.6 感染ALV-J NX0101毒株对鸡免疫NDV和AIV-H9灭活疫苗的抗体抑制作用39
• 3.1.7 三个品系鸡静脉接种NX0101的死亡率和肿瘤发生率39-42
• 3.1.7.1 静脉接毒组死亡率和肿瘤发生率39-40
• 3.1.7.2 卵黄囊接毒组死亡率和肿瘤发生率40-42
• 3.1.8 NX0101 感染对不同地方品系鸡体重的影响42
• 3.2 核酸检测与抗体检测在SPF鸡检测弱毒疫苗中ALV污染时的应用及其比较42-45
• 3.2.1 使用污染疫苗后SPF鸡ALV抗体阳性率分析42-43
• 3.2.2 使用污染疫苗后ALV的核酸阳性率分析43
• 3.2.3 ALV污染对SPF鸡体重的影响43-45
• 4. 讨论45-48
• 5. 结论48-49
• 6. 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 攻读学位期间发表论文情情况况55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：565004