腹水综合征肉鸡心肌糖酵解变化规律研究

发布时间：2017-07-29 03:18

  本文关键词：腹水综合征肉鸡心肌糖酵解变化规律研究

  更多相关文章： 动物福利 食品安全 腹水综合征 糖酵解 磷酸果糖激酶 丙酮酸激酶

【摘要】：现代肉鸡养殖与生产中,肉鸡的动物福利得不到满足,健康问题也越来越突出,肉鸡因此对相关环境因素做出的应激反应对肉鸡食品的安全性产生了消极影响。鉴于当代培育密度高,由缺氧激发的能量代谢异常征-腹水(Ascites Sydrome, AS)发生频率大幅上升。本文着重研究和分析AS病征(又称为肺动脉高压,PAH)的糖酵解机理,研究防治措施,保障食品安全。本文通过H.E染色对病发时主要靶器官心脏进行形态分析,通过荧光定量PCR法、免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法对心肌中调控糖酵解限速酶的基因、蛋白表达进行定位和半定量检测。试验结果显示,与正常肉鸡相比：1)腹水肉鸡的心肌组织松软肥大,肌肉弹性和紧致感变差；2)基因PFK和PKM在腹水心肌中的表达水平上升,表达量分别为1.92士0.14(P0.05)和3.85+0.31(P0.05),差异显著；3)蛋白PFK1、p-PFK2(Ser466)和PKM2在腹水心肌中的表达水平上升,表达量分别为1.18+0.04(P0.01)、1.06+0.16(P0.05)和0.93+0.06(P0.01),差异显著或极显著。全文结论表明与正常肉鸡相比,腹水综合征会使肉鸡心肌能量代谢异常,进而激活糖酵解过程,为缺氧心肌提供能量,保证心肌正常的生理功能。
【关键词】：动物福利 食品安全 腹水综合征 糖酵解 磷酸果糖激酶 丙酮酸激酶
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要6-7
• 第一章 前言7-18
• 1 研究背景及意义7-9
• 1.1 研究背景7-8
• 1.1.1 肉鸡养殖与生产7
• 1.1.2 肉鸡福利与食品安全7-8
• 1.2 研究目的及意义8-9
• 2 肉鸡腹水综合征概述9-14
• 2.1 发病机理9-10
• 2.2 临床特征和病理变化10-11
• 2.3 致病因素11-13
• 2.3.1 遗传与选育11
• 2.3.2 环境因素11-12
• 2.3.3 管理12-13
• 2.4 管理与防治13-14
• 2.4.1 模式正规化13
• 2.4.2 品种抗性化13
• 2.4.3 膳食合理化13
• 2.4.4 其他13-14
• 3 心肌能量代谢的作用机制14-18
• 3.1 正常右心室的能量代谢14
• 3.2 腹水右心室的能量代谢14-15
• 3.3 糖代谢转化与右心肥厚15-16
• 3.4 心肌糖酵解的作用机制16-18
• 3.4.1 糖酵解概述16
• 3.4.2 糖酵解的限速因子16-18
• 第二章 试验研究18-36
• 试验一 腹水综合征肉鸡心肌组织的形态变化18-21
• 1 试验材料18
• 1.1 试验原料18
• 1.2 主要设备18
• 1.3 主要试剂18
• 2 试验方法18-20
• 2.1 Bouins固定液的配制19
• 2.2 载玻片和盖玻片的处理19
• 2.3 石蜡切片的制作19-20
• 3 试验结果与分析20-21
• 试验二 糖酵解调控基因PFK和PKM在腹水综合征肉鸡心肌组织中的表达差异21-28
• 1 试验材料21
• 1.1 试验原料21
• 1.2 主要设备21
• 1.3 主要试剂21
• 2 试验方法21-24
• 2.1 心肌组织的前处理21-22
• 2.2 心肌组织RNA提取22
• 2.3 RNA浓度的测定以及质量检验22
• 2.4 RT-qPCR22-24
• 2.4.1 第一链cDNA的合成以及gDNA的去除22-23
• 2.4.2 引物设计23
• 2.4.3 引物扩X椉白罴裈m试验23-24
• 2.4.4 RT-qPCR反应体系的建立24
• 3 试验结果与分析24-28
• 3.1 引物扩增及最佳退火温度试验24-25
• 3.2 目的基因、内参基因的扩增曲线25-27
• 3.3 基因表达差异的显著性分析27-28
• 试验三 糖酵解调控蛋白PFK1、p-PFK2和PKM2在腹水综合征肉鸡心肌组织中的表达差异28-36
• 1 试验材料28-29
• 1.1 试验原料28
• 1.2 主要设备28-29
• 1.3 主要试剂29
• 2 试验方法29-32
• 2.1 免疫组织化学法29-30
• 2.2 蛋白免疫印迹法30-32
• 2.2.1 心肌组织样品的采取30
• 2.2.2 心肌样品蛋白的提取30-32
• 3 试验结果与分析32-36
• 3.1 目的蛋白PFK1、p-PFK2和PKM2在心肌组织中的定位32-33
• 3.2 目的蛋白PFK1、p-PFK2和PKM2在心肌组织中的表达差异33-36
• 第三章 讨论36-39
• 第四章 结论39-40
• 参考文献40-44
• Abstract44-46
• 致谢46

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本文编号：587268