抗羊口疮病毒ORFV118蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及其应用

发布时间：2017-08-04 15:05

  本文关键词：抗羊口疮病毒ORFV118蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及其应用

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【摘要】：制备抗羊口疮病毒118(ORFV118)重组蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。构建ORFV118原核表达重组质粒pET33b-ORFV118,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,诱导表达出ORFV118重组蛋白;利用Ni-NTA亲和层析法纯化ORFV118重组蛋白;以纯化蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体;利用间接ELISA法、Western blot、免疫组化等方法分别对单抗特异性、效价、亚型以及ORFV118蛋白的功能进行研究。获得了3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为1A2,3B5,5D10,它们诱生的小鼠腹水效价分别为1妣10 000,1妣6 400,1妣8 000。其中效价最高的1A2抗体亚型为IgG1,能特异性结合其免疫原蛋白、真核表达产物以及病羊皮肤组织中的ORFV118蛋白。免疫组化结果显示单抗1A2染色局限于皮肤表皮层角化细胞及浸润至皮下组织的炎症细胞,与病毒侵染上皮组织层的特性相符。制备的单抗1A2能特异性识别ORFV118。深入研究单抗1A2将为了解ORFV118的生物学特性,为羊传染性脓疱病的诊断、预防与治疗提供可能和新思路。
【作者单位】： 南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所;
【关键词】： 羊口疮病毒 ORFV 单克隆抗体 早期蛋白 诊断
【基金】：国家自然科学基金:《羊痘病毒ORFV119蛋白与宿主细胞相互作用的分子机制》(No.31170147)
【分类号】：S852.4
【正文快照】： 羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)属于痘病毒科、副痘病毒属,能够感染山羊、绵羊,也偶发于骆驼[1]、日本鬣羚[2,3]和猫[4,5]等动物,引起一种急性、接触性传染病—羊传染性脓疱病(Orf)。ORFV感染部位局限于羊口鼻部皮肤,常浸润至口腔黏膜的上皮细胞及角质细胞,不会造成全身性感染,典

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本文编号：620189