使用phiC31整合酶构建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表达细胞系

发布时间：2017-08-07 10:40

  本文关键词：使用phiC31整合酶构建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表达细胞系

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【摘要】：为了使用phiC31整合酶建立奶牛胰岛素诱导基因1(INSIG1)的稳定表达乳腺细胞系,首先从奶牛乳腺组织中克隆得到INSIG1基因的编码区,然后将克隆片段与phiC31载体进行BamHⅠ和KpnⅠ双酶切构建INSIG1-C31真核表达质粒;将其与phiC31整合酶质粒共同转染到小鼠乳腺细胞中,采用嘌呤霉素筛选细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达,PCR鉴定细胞基因组中INSIG1基因的表达,荧光定量PCR检测细胞中INSIG1基因的表达。结果表明,试验成功构建INSIG1-C31真核载体,与phiC31整合酶共转染小鼠乳腺细胞,经过8mg/L嘌呤霉素筛选后获得完全表达绿色荧光蛋白的乳腺细胞系;对细胞系鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中,与对照组相比,INSIG1基因的mRNA表达丰度增加了597.98倍(P0.001)。本研究获得了稳定表达奶牛INSIG1基因的乳腺细胞系,为深入研究INSIG1基因功能打下基础。
【作者单位】： 河南农业大学牧医工程学院农业部动物生化与营养重点实验室;
【关键词】： 奶牛 胰岛素诱导基因 phiC整合酶 乳腺细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31072009) 国家转基因重大专项资助项目(2014ZX0801015B) 河南省高等学校重点科研资助项目(15A230020)
【分类号】：S823
【正文快照】： foundation for further research on the role of INSIG1gene.*Corresponding author,E-mail:hubiochem@163.com乳腺作为哺乳动物泌乳的主要器官,其基因表达调控机制一直是研究的重点内容。研究发现,乳腺合成乳脂肪的过程受到多种基因的调控,其中主要的调控因子包括有SREBP1，

本文编号：634247