1,8-桉油素体外杀螨活性及其作用机理的研究

发布时间：2017-08-13 12:32

  本文关键词：1,8-桉油素体外杀螨活性及其作用机理的研究

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【摘要】：桉油为桃金娘科植物蓝桉(Eucalyptus globulus Labill.)、樟科植物樟(Cinnamomum camphora (L.) Sieb.)或上述两科同属其他植物经水蒸气蒸镏得到的挥发油。桉油具有抑菌(真菌和细菌)、杀虫、镇痛抗炎、抗氧化和抗癌等药理活性。1,8-桉油素(1,8-cineole),又称桉油精,是桉油的主要有效成分,含量为58.55%。为缓解目前抗寄生虫药物的生物毒性、耐药性等弊端,寻找新的抗兔疥螨(Sarcoptes scabiei var.cuniculi)药物,本课题对1,8-桉油素的杀螨活性进行测定,并通过形态学及测定虫体内各种酶活性的变化,初步评价1,8-桉油素的杀螨机理。主要研究结果如下：1.1,8-桉油素的体外抗疥螨活性测定：采用离体浸杀的方法,评价1,8-桉油素的体外抗疥螨活性并测定其抗兔疥螨的半数致死浓度(Lethal Concentration of 50%, LC50)和半数致死时间(Lethal Temperature of 50%, LT50)。结果显示：1,8-桉油素在12h的LC50为2.77 mg/mL,当1,8-桉油素浓度为9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL时,其LT50分别为3.606 h、7.416 h、11.296 h。以上结果表明,1,8-桉油素具有较好的杀螨活性,其作用效果呈现一定的浓度依耐性。2.1,8-桉油素对兔疥螨形态学的影响：用浓度为2.3 mg/mL、4.6 mg/mL、9.2mg/mL的1,8-桉油素处理兔疥螨,在光学显微镜下观察幼螨的运动情况,并制作超薄切片,研究药物对疥螨虫体超微结构的影响。结果表明：在光学显微镜下,用药后的开始不停地急剧运动,兴奋异常;一段时间后虫体扩散逃逸,发现大量虫卵；最后虫体收缩变小、死亡。超微电镜下,正常组虫体皮肤层具有规律性的条纹,体腔细胞完整;用药组虫体皮肤层变得无规律,体腔细胞细胞膜溶解,线粒体空泡化,细胞核溶解消失。由此可知,1,8-桉油素可能主要通过影响虫体的吞噬系统、能量代谢系统和神经系统,最终导致虫体死亡。3.1,8-桉油素对兔疥螨酶活性的影响：以浓度为9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL的1,8-桉油素作为实验组,液体石蜡作为空白对照组处理兔疥螨,分别在4h、8h和12h采集虫体提取酶原液,分别测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathione-s-transferases, GSTs)、单胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的活性。结果表明：保护酶类的酶活性的变化：在12h内,不同浓度的1,8-桉油素处理疥螨虫体后,虫体的SOD酶活性均升高,其中,1,8-桉油素浓度处理虫体4 h时,SOD升高率最高为43.83%；1,8-桉油素处理虫体12h时,SOD升高率最低为6.11%。结果表明1,8-桉油素能够诱导疥螨虫体SOD活性的升高。防御酶类的酶活性的变化：在12 h内,不同浓度的1,8-桉油素处理疥螨虫体后,虫体的GSTs酶活性均升高,其中,1,8-桉油素处理12h时GSTs活性升高率最高为684.02%；处理4h时GSTs活性升高率最低为41.10%。结果表明1,8-桉油素能够激活虫体的防御系统,诱导GSTs活性升高,降低1,8-桉油素对机体的损伤。神经传递酶类的酶活性的变化：在12 h内,不同浓度的1,8-桉油素处理疥螨虫体后,虫体的MAO酶活性均升高,其中1,8-桉油素处理4h时MAO活性升高率最高为244.73%;处理12 h时MAO活性升高率最低为17.99%。结果表明1,8-桉油素能够升高MAO活性,导致神经传递加快,引起虫体兴奋异常。在0-8 h,不同浓度的1,8-桉油素处理疥螨虫体后,虫体的Ca2+-ATPase的活性升高；在12 h,虫体的Ca2+-ATPase的活性是被抑制的。结果表明在1,8-桉油素作用前期,虫体兴奋异常,急剧运动,消耗大量ATP；随着药物作用时间的延长,虫体逐渐趋于死亡,机体对ATP的需求减少,酶活性降低。神经效应酶类的酶活性的变化：在12h内,不同浓度的1,8-桉油素处理疥螨虫体后,虫体的AChE酶活性均被抑制,浓度为9.2 mg/mL时AChE酶活性抑制率最大为65.52%,浓度为2.3 mg/mL时抑制率最小为10.87%。结果表明1,8-桉油素能够抑制AchE活性,引起虫体突触间隙乙酰胆碱(Ach)积累,导致虫体持续兴奋,且1,8-桉油素浓度越高,酶活性的抑制率越高。在12h内,用不同浓度1,8-桉油素处理兔疥螨,当1,8-桉油素浓度为9.2 mg/mL时,NOS的活性被抑制,抑制率最高为52.98%；当1,8-桉油素浓度为4.6 mg/mL和2.3 mg/mL时,NOS的活性升高,升高率最高为269.12%。结果表明1,8-桉油素对疥螨NOS活性呈现高浓度抑制、低浓度促进的作用。通过对1,8-桉油素的杀螨活性的测定、形态学的观察和疥螨虫体酶活性的测定,研究结果表明1,8-桉油素主要通过影响疥螨体内跟神经信号传导有关的Ca2+-ATPase和NOS的活性,引起虫体过度兴奋而死亡。
【关键词】：1 8-桉油素 杀螨活性 超微结构 酶活性
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略词表9-13
• 第一章 文献综述及研究目的与意义13-20
• 1 文献综述13-18
• 1.1 桉油的来源13
• 1.2 桉油的药理研究概况13-18
• 2 研究目的及意义18-20
• 2.1 研究目的18-19
• 2.2 实验流程图19-20
• 第二章 1,8-桉油素体外杀螨活性研究20-25
• 1 材料与方法20-21
• 1.1 材料20-21
• 1.2 方法21
• 2 结果21-24
• 2.1 疥螨幼虫的鉴定21-22
• 2.2 半数致死浓度的测定22-23
• 2.3 半数致死时间测定23-24
• 3 分析与讨论24
• 4 小结24-25
• 第三章 1,8-桉叶油素对疥螨形态学的影响25-29
• 1 材料与方法25-26
• 1.1 材料25
• 1.2 方法25-26
• 2 结果26-27
• 2.1 1,8-桉油素杀螨症状观察26
• 2.2 1,8-桉油素体外杀螨的超微结构观察26-27
• 3 分析与讨论27-28
• 3.1 1,8-桉油素杀螨症状观察27
• 3.2 透射电镜观察1,8-桉油素对疥螨幼虫的超微结构影响27-28
• 4 小结28-29
• 第四章 1,8-桉叶油素对疥螨体内保护酶的影响29-34
• 1 材料与方法29-31
• 1.1 材料29
• 1.2 方法29-31
• 2 结果31-32
• 3 分析与讨论32-33
• 4 小结33-34
• 第五章 1,8-桉叶油素对疥螨体内解毒酶的影响34-38
• 1 材料与方法34-35
• 1.1 材料34
• 1.2 方法34-35
• 1.3 数据处理35
• 2 结果35-37
• 3 分析与讨论37
• 4 小结37-38
• 第六章 1,8-桉叶油素对疥螨体内神经传递酶类的影响38-46
• 1 材料与方法38-41
• 1.1 材料38-39
• 1.2 方法39-41
• 1.3 数据处理41
• 2 结果41-44
• 2.1 MAO测量结果41-42
• 2.2 Ca~(2+)-ATPase测量结果42-44
• 3 分析与讨论44-45
• 3.1 1,8-桉油素对兔疥螨幼虫MAO活性的影响44
• 3.2 1,8-桉油素对兔疥螨幼虫Ca~(2+)-ATPase活性的影响44-45
• 4 小结45-46
• 第七章 1,8-桉叶油素对疥螨体内神经效应酶类的影响46-53
• 1 材料与方法46-48
• 1.1 材料46-47
• 1.2 方法47-48
• 2 结果48-52
• 2.1 AChE活性测量结果48-50
• 2.2 NOS活性测量结果50-52
• 3 讨论与分析52
• 3.1 1,8-桉油素对兔疥螨幼虫Ache活性的影响52
• 3.2 1,8-桉油素对兔疥螨幼虫NOS活性的影响52
• 4 小结52-53
• 第八章 结论与创新53-54
• 1 结论53
• 2 创新53-54
• 参考文献54-63
• 致谢63-64
• 附图64-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：667323