转DGAT1基因小鼠与野生型小鼠腓肠肌差异表达基因的筛选与分析

发布时间：2017-08-13 13:44

  本文关键词：转DGAT1基因小鼠与野生型小鼠腓肠肌差异表达基因的筛选与分析

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【摘要】：脂肪是哺乳动物主要的储能物质,能够为机体提供能量,缓解外界对内脏器官的压力,同时还能影响肉的食用价值,特别是对肌内脂肪含量、嫩度等有重要影响。脂肪的主要成分是三酰甘油,DGAT1是控制三酰甘油合成的关键酶,研究其作用机制有助于提升肌内脂肪的含量,改善肉的品质。本实验以肌肉超表达DGAT1的转基因小鼠和野生型小鼠为实验动物,采用Affymetrix公司AFF-902462的小鼠基因组芯片,检测转DGAT1小鼠腓肠肌的差异表达基因,以期能找到DGAT1调控肌内脂肪沉积的新机制。用Expression Console软件对芯片数据进行分析,结果显示在转DGAT1基因小鼠的腓肠肌中差异表达倍数(fold change)大于1.5倍且P0.05的基因有281个,其中有169个上调表达,112下调表达。采用PCR技术对其中10个基因(SREBF1,PDK4,UCP3,DUSP1,FKBP5,ZBTB16,PLAGL1,PPP1R3C,CDC14A和GLUL1)进行验证,RT-PCR与芯片结果一致。利用MAS3.0对差异表达基因进行信号通路分析,信号通路主要集中在G蛋白偶联受体、信号转导、氧化还原、嗅觉感受器受体活性、蛋白结合、锌离子结合等,本结果为DGAT1调控肌内脂肪的作用机制提供了理论依据。
【关键词】：肌内脂肪 三酰甘油 肉质 DGAT1 基因芯片
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.2
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 中英文缩写对照表8-9
• 第一章 文献综述9-16
• 1 引言9
• 2 脂肪形成概述9-10
• 3 脂肪的分类10
• 4 影响肌内脂肪沉积的因素10-11
• 4.1 外部因素10-11
• 4.2 内部因素11
• 5 三酰甘油的合成11-12
• 6 DGAT1基因的研究进展12-15
• 6.1 DGAT1对胰岛素和瘦素敏感性的影响13
• 6.2 DGAT1对白色脂肪内分泌功能的影响13-14
• 6.3 DGAT1对采食量和能量代谢的影响14
• 6.4 DGAT1对器官生理功能的影响14-15
• 7 本研究的目的和意义15-16
• 第二章 材料与方法16-24
• 1 材料16-18
• 1.1 主要仪器与设备16-17
• 1.2 主要试剂及试剂盒17
• 1.3 常用化学试剂及其配制17
• 1.4 主要分子生物学软件及数据库17-18
• 2 方法18-24
• 2.1 DNA的提取18
• 2.2 DGAT1转基因小鼠的鉴定18-19
• 2.3 组织总RNA的提取19-20
• 2.4 RNA的反转录20-21
• 2.5 芯片数据的分析21
• 2.6 RT-PCR验证基因芯片21
• 2.7 RT-PCR的引物的设计和合成21-23
• 2.8 基因差异表达分析23
• 2.9 RT-PCR结果和基因芯片结果的相关系数和显著性分析23-24
• 第三章 结果与分析24-37
• 1 部分DGAT1转基因小鼠的PCR鉴定24
• 2 总RNA的质检结果24-25
• 3 芯片信号值分布结果25
• 4 各样品主成分分析结果25-26
• 5 差异基因的层次聚类26-27
• 6 组间差异基因的筛选27-30
• 7 RT-PCR和基因芯片两种结果的相关性分析30
• 8 差异表达基因的生物信息学分析30-37
• 8.1 差异表达基因KEGG Pathway分析30-32
• 8.2 差异基因之间的相互关系分析32-33
• 8.3 差异基因编码蛋白的互作分析33-34
• 8.4 差异表达基因Gene ontology（GO）分析34-37
• 第四章 讨论37-41
• 1 利用基因芯片检测肌肉超表达DGAT1后基因表达的变化37
• 2 不同类型差异基因的生物学功能分析37-40
• 2.1 糖代谢相关基因37-38
• 2.2 脂肪合成相关基因38-39
• 2.3 脂肪氧化相关基因39-40
• 2.4 应激相关基因40
• 3 下一步工作计划40-41
• 小结41-42
• 参考文献42-53
• 致谢53

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本文编号：667612