REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

发布时间：2017-08-15 12:26

  本文关键词：REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

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【摘要】：禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制为主的肿瘤性疾病。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、荧光定量PCR技术,较全面系统的检测了雏鸡外周血白细胞,异嗜性粒细胞数量、T淋巴细胞及其对Con A的增殖功能、B淋巴细胞及其对LPS的增殖功能、免疫球蛋白(Ig G、IgA、Ig M)含量及Cyclin D1和p27 mRNA表达的动态变化,旨在进一步揭示REV感染SPF雏鸡后,其对机体外周血免疫能力与Cyclin D1和p27 mRNA表达变化的影响,为更好地防治RE提供重要的科学依据。主要研究结果如下:(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血白细胞总数、异嗜性粒细胞、T淋巴细胞数量及其对Con A的增殖功能在REV感染后1~42天,均不同程度低于相应对照雏鸡;其中,异嗜性细胞和TANAE+细胞数量均在病毒感染后14~42天,极显著(P0.01)低于对照雏鸡;而白细胞总数在REV感染后7~42d,与对照雏鸡相比极显著(P0.01)下降;T淋巴细胞对Con A的增殖能力,在病毒感染后14~21d和42d,与对照雏鸡相比显著下降(P0.01或P0.05)。表明SPF雏鸡感染REV后,外周血细胞免疫能力明显受损。(2)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血B淋巴细胞对LPS的增殖能力和免疫球蛋白IgG、Ig A、Ig M含量在REV感染后1~42d,均不同程度低于相应对照雏鸡;其中,Ig G、Ig A、Ig M含量在REV感染后14~28天、21~42d和42d,均显著(P0.05)或极显著(P0.01)低于相应对照雏鸡。表明SPF雏鸡感染REV后,外周血体液免疫能力受到严重抑制。(3)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血Cyclin D1和p27 m RNA表达在病毒感染后7~42d,均高于相应对照雏鸡,其中Cycling D1 mRNA表达极显著(P0.01)高于相应对照组;表明Cyclin D1与p27 m RNA过表达和REV所致的细胞增殖密切相关。
【关键词】：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡 外周血液 Cyclin D1 mRNA p27 mRNA
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-19
• 1.1 禽网状内皮组织增生病及其研究进展11-13
• 1.1.1 RE的病原学11-12
• 1.1.2 REV流行病学12
• 1.1.3 RE发病机制及其主要临诊症状12-13
• 1.1.4 REV感染与动物免疫抑制13
• 1.2 细胞周期及其研究进展13-16
• 1.2.1 细胞周期概述13-14
• 1.2.2 细胞周期素及其研究进展14-15
• 1.2.3 细胞周期素D1及其研究进展15-16
• 1.3 p27及其研究进展16-17
• 1.3.1 p27概述16-17
• 1.3.2 p27作用机制17
• 1.3.3 p27与肿瘤17
• 1.4 本项目研究的目的与意义17-19
• 2 材料与方法19-27
• 2.1 试验材料19-20
• 2.1.1 试验动物19
• 2.1.2 REV毒株19
• 2.1.3 主要化学试剂和生物制剂19-20
• 2.1.4 主要仪器与设备20
• 2.2 试验方法20-26
• 2.2.1 试验动物分组及其处理20
• 2.2.2 被检材料采取20-21
• 2.2.3 检测指标与方法21-26
• 2.3 数据处理26-27
• 3 结果与分析27-49
• 3.1 REV感染SPF雏鸡外周血相关细胞数量变化27-30
• 3.1.1 REV感染SPF雏鸡外周血TANAE+细胞数量的变化27-28
• 3.1.2 REV感染雏鸡外周血异嗜性粒细胞数量的变化28-29
• 3.1.3 REV感染SPF雏鸡外周血白细胞总数变化29-30
• 3.2 REV感染SPF雏鸡外周血免疫球蛋白含量变化30-33
• 3.2.1 REV感染SPF雏鸡外周血Ig G含量变化30-31
• 3.2.2 REV感染SPF雏鸡外周血Ig A含量变化31-32
• 3.2.3 REV感染SPF雏鸡外周血Ig M含量变化32-33
• 3.3 REV感染SPF雏鸡外周血T、B淋巴细胞增殖功能变化33-35
• 3.3.1 REV感染SPF雏鸡外周血T淋巴细胞增殖功能变化33-34
• 3.3.2 REV感染SPF雏鸡外周血B淋巴细胞增殖功能变化34-35
• 3.4 REV感染SPF雏鸡外周血Cyclin D1与p27 mRNA表达Real Time—PCR检测方法的建立35-49
• 3.4.1 总RNA提取35
• 3.4.2 鸡Cyclin D1、p27与 β-actin目的片段的RT-PCR扩增35-37
• 3.4.3 重组质粒PCR鉴定37-38
• 3.4.4 Cyclin D1、p27与 β-actin基因扩增及其序列测定38-39
• 3.4.5 标准曲线的绘制39-43
• 3.4.6 REV感染SPF雏鸡外周血Cyclin D1与p27 mRNA表达的Real43-46
• 3.4.7 REV感染SPF雏鸡外周血Cyclin D1和p27 mRNA表达量变化46-49
• 4 讨论49-52
• 4.1 REV感染对SPF雏鸡外周血细胞免疫功能的影响及机制49
• 4.2 REV感染对SPF雏鸡外周血体液免疫功能的影响及其机制49-50
• 4.3 REV感染对SPF雏鸡外周血Cyclin D1和p27 mRNA表达的影响及其机制50-52
• 4.3.1 REV感染对SPF雏鸡外周血Cyclin D1 mRNA表达的影响及其机制50-51
• 4.3.2 REV感染对SPF雏鸡外周血p27 mRNA表达的影响及其机制51-52
• 5 结论52-53
• 致谢53-54
• 参考文献54-62
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文62

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1 刘文超;REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响[D];东北农业大学;2016年

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