广东省H3N2亚型犬流感血清流行病学调查和病毒的分离、鉴定及遗传进化分析

发布时间：2017-08-16 00:14

  本文关键词：广东省H3N2亚型犬流感血清流行病学调查和病毒的分离、鉴定及遗传进化分析

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【摘要】：流感病毒包括人流感病毒和动物流感病毒,是一种重要的人畜共患病病毒。流感病毒能发生跨物种感染和传播,近年来,不断有禽源和其他动物源的流感病毒感染人类的报道,对人类健康和公共卫生构成了巨大威胁。2004年美国首次分离了犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)。2006年我国华南农业大学外科教研室分离得到第一株H3N2亚型CIV。犬已成为流感病毒一个新型的哺乳动物宿主,也使犬成为流感病毒传播给人的潜在中间宿主。犬群中流行的主要是美洲流行株CIV H3N8和亚洲流行株CIV H3N2两种亚型。我国对于CIV的流行病学情况和该病毒的致病机制了解甚少。为了更好地对H3N2亚型CIV的感染、传播和流行进行监测,本研究对广东地区H3N2亚型CIV从血清流行病学和病原学两个方面进行了研究,旨在全面了解CIV流行病学情况,并探索犬流感病毒对犬的致病分子机制。血清流行病学调查:2013年11月-2014年12月,从宠物市场犬、活禽市场犬和农村犬三个犬群分别进行随机血清采样,共采集了764份血清样品,通过血凝抑制试验(HI)和微量中和实验(MN)对所采集的样品进行分析。结果显示:宠物犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亚型抗体阳性率为17.7%(67/378);农村犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亚型抗体阳性率为15.0%(28/216);活禽交易市场犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亚型抗体阳性率为13.5%(23/170)。整体的阳性率为15.4%(118/764)。表明宠物犬感染犬流感病毒的风险较大,活禽市场犬和农村犬感染禽流感病毒在流感生态圈和流感病毒的传播中发挥着一定的作用。病毒的分离鉴定:为了分析广州地区的流行毒株的特点,从广州市24家宠物医院根据犬感染流感病毒的临床症状,共采集到17只疑似犬流感病例的鼻拭子,通过对样品进行血凝实验(HA:hemagglutination)和M基因DNA扩增技术(PCR:polymerase chain reaction)的鉴定,从中成功分离到一株H3N2亚型的犬流感病毒,暂命名为:A/canine/Guangdong/10/2014(H3N2),把分离得到的八个片段输入genotype tool进行重组鉴定,分析显示该病毒为非重组的禽源H3N2亚型犬流感。通过MEGA 5.0分析软件,将该株新分离的H3N2CIV毒株的各个基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF)中的核苷酸序列进行比对,并在此基础上绘制系统发育进化树。结果显示,该病毒为禽源的H3N2亚型流感病毒,和之前本实验室分离到的毒株的进化关系较近。这说明H3N2亚型犬流感病毒在广东省犬群中流行和传播,暂没有发生大的变异。然而对H3N2亚型犬流感病毒还需要持续不断的跟踪监测。
【关键词】：犬流感 血清学 流行病学 分离 鉴定 遗传进化分析
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S855.3
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 文献综述9-22
• 1 A型流感病毒9-15
• 1.1 A型流感病毒概况9
• 1.2 A型流感病毒的形态9-10
• 1.3 A型IAVs基因组的结构和功能10-14
• 1.4 生态学和传染病学14-15
• 1.5 流感病毒的防治措施15
• 2 犬流感病毒概述15-20
• 2.1 不同亚型的犬流感病毒16-19
• 2.2 犬流感的诊断19-20
• 2.3 犬流感的治疗和预防20
• 3 本研究的设计思路20-22
• 第二章 广东省H3N2亚型犬流感的血清流行病学调查22-31
• 1 材料22-24
• 1.1 样品来源22-23
• 1.2 参考毒株、血清、细胞和鸡胚23
• 1.3 主要试剂23
• 1.4 其他试剂23-24
• 1.5 主要仪器24
• 2 方法24-27
• 2.1 血清样品处理24
• 2.2 血凝抑制试验(HI)24-25
• 2.3 微量中和实验（Microneutralization assay，MN）25-27
• 3 结果27-29
• 3.1 宠物犬血清中流感抗体检测27-28
• 3.2 活禽交易市场犬和农村犬血清中流感抗体检测28-29
• 4 讨论与分析29-31
• 第三章 广州地区H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析31-51
• 1 材料31-33
• 1.1 样品采集31
• 1.2 试剂和鸡胚31-32
• 1.3 其他试剂32
• 1.4 主要仪器32
• 1.5 引物设计与合成32-33
• 2 方法33-37
• 2.1 鸡胚接种33-34
• 2.2 红细胞凝集（HA）试验34
• 2.3 保存样品34
• 2.4 病毒的RT-PCR检测34-37
• 3 结果与分析37-50
• 3.1 八个片段pcr扩增结果37
• 3.2 病毒全基因组同源性分析37-38
• 3.3 病毒全基因组的遗传进化分析38-50
• 3.3.1 HA基因分析38-41
• 3.3.2 NA基因分析41-43
• 3.3.3 M基因分析43-44
• 3.3.4 NS基因分析44-45
• 3.3.5 NP基因分析45
• 3.3.6 PB1基因分析45-47
• 3.3.7 PB2基因分析47-48
• 3.3.8 PA基因分析48-50
• 4 小结50-51
• 第四章 全文结论51-52
• 致谢52-53
• 参考文献53-58
• 个人简介58-59
• 导师简介59-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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本文编号：680571