Lcn5对山羊精子获能和运动能力的影响

发布时间：2017-08-18 08:38

  本文关键词：Lcn5对山羊精子获能和运动能力的影响

  更多相关文章： 山羊 Lcn5 精子获能 精子运动 宫颈粘液穿透力

【摘要】：附睾视黄酸结合蛋白(Lcn5)是运脂蛋白质家族(Lipocalin, Lcn)的一员,已有研究表明Lcn5在山羊附睾和睾丸中表达量较高,且Lcn5位于山羊精子顶体帽区域和尾部中段。推测Lcn5可能在精子的成熟和获能等方面发挥重要的作用。本试验旨在研究Lcn5对山羊精子获能和运动能力的影响。利用精子免疫荧光技术对获能前后精子中Lcn5进行定位;使用10μg/mL、50μg/mL、 100μg/mL Lcn5抗体处理精子后,用精液综合分析系统(Integrated Semen Analysis System,ISAS)分析精子活力,金霉素(CTC)染色法检验精子获能率,筛选Lcn5抗体诱导精子获能的适宜浓度并分析Lcn5对精子获能的影响;使用适宜浓度的Lcn5抗体(10 μg/mL)处理精子,1h内每隔10 min取样检测精子活力、精子运动参数和精子获能率,筛选Lcn5抗体诱导精子获能的适宜时间并分析Lcn5对精子运动能力的影响；采集发情母羊宫颈粘液,使用筛选出的Lcn5抗体适宜处理浓度和时间(10μg/mL,30min)处理精子后,利用宫颈粘液穿透实验评定精子的穿透力。主要结果如下：1.免疫荧光结果显示,精子获能前Lcn5位于山羊精子顶体帽区域和尾部中段,使用肝素诱导精子获能后,顶体区Lcn5信号消失,尾部中段仍可检测到Lcn5阳性信号。2.CTC染色和ISAS分析结果显示,经10μg/mL Lcn5抗体处理后精子的获能率和快速运动精子百分比显著高于50μg/mL和100μg/mL Lcn5抗体处理组(P0.05),中速运动精子与100μg/mL抗体处理组差异不显著(P0.05),显著高于50μg/mL抗体处理组(P0.05)。使用10μg/mL Lcn5抗体,30 min处理精子组获能率和40 min处理组差异不显著(P0.05),都显著高于其它时间处理组(P0.05); 30min处理组中速运动精子显著高于其它时间处理组(P0.05);处理30 min组平均直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、摆动性线性度(LIN)、精子向前性(STR)、摆动性(WOB)和平均鞭打频率(BCF)显著高于其它时间处理组(P0.05)。处理40 min组精子平均曲线速度(VCL)与处理30 min组差异不显著(P0.05),显著高于其它时间处理组(P0.05)。3、宫颈粘液穿透实验结果显示,经Lcn5抗体处理后精子在宫颈粘液中的穿透能力与经肝素诱导获能后精子的穿透能力差异不显著(P0.05),都显著高于对照组(P0.01)。结论：Lcn5覆盖于未获能精子顶体帽区域和尾部中段,精子获能后随着顶体的脱落精子头部Lcn5消失,尾部中段Lcn5无明显变化;Lcn5抗体处理精子可诱导精子获能和顶体反应,内源性Lcn5具有保护精子顶体完整性和调控精子获能的作用;经Lcn5抗体处理后,精子的运动能力和宫颈粘液穿透力增强。
【关键词】：山羊 Lcn5 精子获能 精子运动 宫颈粘液穿透力
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要7-9
• 第一章 文献综述9-19
• 1 精子获能9-10
• 2 精子获能的分子机制10-11
• 3 精子体外获能影响因素11-12
• 3.1 动物种类和精子来源部位11
• 3.2 温度、PH和渗透压11-12
• 4 精子处理方法12-14
• 4.1 上浮法12
• 4.2 离心洗涤法12
• 4.3 Percoll密度梯度离心法12-13
• 4.4 Isolate梯度离心法13
• 4.5 微流控芯片技术13-14
• 5 精子体外获能诱导物14-15
• 5.1 肝素14
• 5.2 钙离子载体14-15
• 6 精子获能的鉴定方法15-17
• 6.1 观察精子超激活运动15
• 6.2 检测顶体反应15-16
• 6.3 穿卵实验16-17
• 7 宫颈粘液穿透实验17
• 8 本试验选题依据与创新点17-19
• 第二章 Lcn5在精子中的定位及获能前后的变化分析19-25
• 1 材料与方法19-22
• 1.1 试验动物与样品采集19
• 1.2 主要仪器与试剂19-21
• 1.3 试验方法21-22
• 1.4 图片分析22
• 2 结果22-23
• 3 讨论23-25
• 第三章 Lcn5对精子获能和精子运动能力的影响25-39
• 1 材料与方法25-26
• 1.1 试验动物与样品采集25
• 1.2 主要仪器与试剂25
• 1.3 试验方法25-26
• 1.4 数据处理26
• 2 结果26-37
• 2.1 Lcn5抗体浓度的筛选26-29
• 2.2 Lcn5抗体处理时间的筛选29-34
• 2.3 Lcn5抗体不同处理时间对精子运动参数的影响34-37
• 3 讨论37-39
• 3.1 Lcn5对精子获能的影响37
• 3.2 Lcn5对精子运动能力的影响37-39
• 第四章 Lcn5在精子穿透宫颈粘液中的作用39-44
• 1 材料与方法39-41
• 1.1 试验动物与样品采集39
• 1.2 主要仪器与试剂39
• 1.3 试验方法39-41
• 1.4 数据处理41
• 2 结果41-42
• 3 讨论42-44
• 全文结论44-45
• 后续研究设想45-46
• 参考文献46-51
• Abstract51-53
• 附录53-55
• 致谢55

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李碧春;鸡精子获能的检测[J];中国家禽;2004年06期

2 张士芳;;哺乳动物的精子获能及其鉴定[J];黑龙江动物繁殖;2010年02期

3 张旭成;袁慧敏;金一;;猪精子获能期间蛋白质磷酸化时间依赖性的上调[J];江西农业大学学报;2010年03期

4 周明;刘芳芳;;氯离子等营养因子对精子获能影响的研究进展[J];安徽农业大学学报;2011年05期

5 李基玉;;牛的精子获能所需时间问题的探讨[J];上海畜牧兽医通讯;1989年05期

6 贺亚南;朱化彬;陈晓丽;郝海生;秦彤;赵学明;路永强;王栋;;哺乳动物精子获能前后的理化变化及获能机制研究进展[J];畜牧兽医学报;2013年12期

7 张光景;张佳慧;杨波;张静;蔡缪荧;郝同杨;李拥军;;不同获能液及不同处理方法对兔精子获能的影响[J];中国畜牧杂志;2014年09期

8 李东全,罗光彬,张小华,袁水桥,朱增娟;哺乳动物精子获能的分子机制[J];动物医学进展;2005年08期

9 高志峰;张博;何剑斌;;碳酸氢根对精子功能的影响[J];中国畜牧兽医文摘;2006年06期

10 丁爱军;叶绍辉;苏雷;;哺乳动物精子获能机理及体外研究[J];现代畜牧兽医;2007年09期

中国重要会议论文全文数据库 前9条

1 陈文颖;许文明;倪崖;石其贤;周思畅;陈爱君;周晨曦;DK Rowland;钟耀华;陈小章;袁玉英;;豚鼠精子获能依赖于胞外氯离子及其可能参与的不同离子通道和转运子[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年

2 贺亚南;朱化彬;郝海生;赵学明;杜卫华;秦彤;刘岩;王栋;;哺乳动物精子获能前后的生理变化[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年

3 吴俊波;金一;曹立朋;李蒙蒙;杨璐茜;田宇;孙培亮;;低温对猪精子微管蛋白表达量的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集[C];2012年

4 倪崖;陈爱君;袁玉英;陈文颖;周思畅;石其贤;;Cl~-及其通道在精子细胞获能中的作用研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

5 陈文颖;许文明;陈璋辉;石其贤;倪崖;周思畅;李坤;孙丽文;陈小章;袁玉英;;氯离子及其通道在豚鼠精子获能中的作用[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

6 陈文颖;许文明;陈璋辉;石其贤;周思畅;李坤;孙丽文;陈小章;袁玉英;倪崖;;CL~-及其通道在精子获能和精卵融合中的作用[A];第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议论文集[C];2008年

7 陈文颖;袁玉英;石其贤;周晨曦;陈小章;;Cl~-通道在精子获能中的作用及其与蛋白酪氨酸磷酸化[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年

8 倪崖;郑敏;陈文颖;陈爱君;张永莲;石其贤;;附睾特异性蛋白Hong rES1参与豚鼠精子获能[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

9 倪崖;周晨曦;陈璋辉;李坤;陈文颍;许文明;陈小章;石其贤;;GABA激活GABA_A receptor/Cl~-通道诱发大鼠精子获能需要HCO_3~-和Cl~-参与[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 王静;人类精子获能的磷酸化蛋白质组学研究[D];南京医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张彩霞;Lcn5对山羊精子获能和运动能力的影响[D];山西农业大学;2016年

，

本文编号：693650