青蒿素与复方磺胺间甲氧嘧啶联合应用抗鸡柔嫩艾美尔球虫的疗效试验及其机制探讨

发布时间：2017-08-18 12:31

  本文关键词：青蒿素与复方磺胺间甲氧嘧啶联合应用抗鸡柔嫩艾美尔球虫的疗效试验及其机制探讨

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【摘要】：鸡球虫病是由艾美耳属原虫寄生于肠上皮细胞而引起的一种急性寄生虫病,常造成严重的经济损失。抗球虫药的广泛使用,导致球虫对多种药物产生耐药性。因此研究新型抗球虫药迫在眉睫。中草药由于其源于天然,毒副作用低、较少产生耐药性等优点而倍受重视,越来越多的中草药被证实具有一定的抗球虫作用,如常山、苦参、大蒜等。青蒿素(artemisinin, ART),是从菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L)中提取的抗疟疾有效成分,为有过氧基团的一种倍半萜内酯化合物。药学家屠呦呦由于青蒿素的发现和在治疗疟疾方面的杰出贡献,并获得了2015年度诺贝尔医学奖。ART不仅可以抗疟原虫,还可以抗利什曼虫、血吸虫、球虫等多种寄生虫,同时具有抗炎、免疫调节和抗肿瘤等多方面的药理作用。近年研究表明,ART在抗球虫方面具有一定疗效。复方磺胺间甲氧嘧啶预混剂由磺胺间甲氧嘧啶(sulfamonomethoxine, SM)和甲氧苄啶(TMP)组成,常用于防治畜禽细菌感染和球虫病。本试验利用E.tenella制作球虫病模型,将ART、CoSMM单独或联合使用,探讨两者之间是否存在增效作用,从而为球虫病的防治提供参考。具体研究内容如下：1.为了探讨ART与复方磺胺间甲氧嘧啶(compond sulfamonomethoxine, CoSMM)联合用药对鸡球虫病的防治效果。试验选用80只1日龄绿壳蛋公鸡,正常饲养至13日龄分为5组,14日龄时除空白对照组(Control)外其他试验组分别以8万个/羽的剂量接种E. tenella孢子化卵囊,各用药组在感染前一天开始用药至试验结束。试验结束后通过对各组鸡存活率、日均增重、盲肠病变计分、抗球虫指数(ACI)、免疫器官指数等数据进行统计分析,评价联合用药的抗球虫作用。结果显示ART+CoSMM联合用药组在ART和CoSMM剂量减半的情况下,与ART组和CoSMM组相比能明显提高ACI,且平均日增重显著高于球虫感染对照组(EI)及ART组。2.为探讨ART和CoSMM联合用药抗E. tenenlla的协同效应机制。将80只雄性绿壳蛋鸡分为5组。试验结束时采集各组盲肠上段制作石蜡切片,并结合扫描电镜观察鸡盲肠组织的病理变化；采集各组试验鸡抗凝血进行白细胞计数分析；对各试验组鸡盲肠组织中的IL-6、10、13、17、TNF-α进行ELISA及荧光定量PCR检测。病理学观察显示相较于EI组各药物处理组鸡盲肠病变得到显著改善,其中联合用药组病变最轻。ELISA检测结果发现,EI组与Control组相比促炎因子IL-6、17含量显著升高(P0.01),抗炎因子IL-10、13含量显著下降(P0.01)。各药物处理组与EI组相比,促炎细胞因子TNF-α、IL-17含量显著降低(P0.05)；抗炎细胞因子含量升高(IL-10(P0.05), IL-13(P0.01)), ART+CoSMM差异极显著(P0.01)。荧光定量PCR检测结果显示,EI组与Control组相比促炎因子显著升高P0.01),抗炎因子显著下降(P0.01)。各药物处理组与EI组相比,促炎因子IL-6、17含量显著下降,抗炎因子IL-10、13显著上升,其中以ART+CoSMM差异极显著(P0.01)。3.为探讨ART和CoSMM联合用药抗E.tenenlla第二代裂殖子的协同效应机制。试验采用流式细胞技术分析各组E.tenella第二代裂殖子膜电位和凋亡比例；透射电镜观察其超微结构。试验结果发现与EI组相比,其他各组裂殖子数量分别下降了23.22%、35.49%、53.34%；凋亡比例分别上升为EI组的4.25倍、5.86倍、9.62倍；各组的线粒体膜电位分别提了34.41%、25.41%、71.26%。透射电镜发现,各药物处理组均出现不同程度的凋亡表征,其中以ART+CoSMM组尤其明显。以上数据表明ART与CoSMM均可造成E.tenella第二代裂殖子凋亡,ART与CoSMM联合用药则具有明显的协同促进凋亡作用。综上所述,ART和CoSMM联合使用在ART和CoSMM用量均减半的情况下,在抗E.tenella疗效上、改善肠道病变、减轻肠道炎症、促进第二代裂殖子凋亡上均表现出协同增效作用。ART主要从减少肠道炎症及部分促第二代裂殖子凋亡来发挥抗E.tenella作用,CoSMM主要从促第二代裂殖子凋亡来发挥抗E.tenella作用,两者合用则从这两方面共同发挥抗E.tenella作用。
【关键词】：柔嫩艾美尔球虫 青蒿素 复方磺胺间甲氧嘧啶 协同作用
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 符号说明9-10
• 文献综述10-20
• 1. 鸡球虫病的简介10-11
• 1.1 鸡球虫的分类10
• 1.2 鸡球虫的生活史10
• 1.3 鸡球虫病的危害10-11
• 2. 鸡球虫病的防治研究进展11-16
• 2.1 鸡球虫病的疫苗防治11-13
• 2.2 鸡球虫病的药物防治及其机理研究13-16
• 3. 青蒿素的研究现状16-17
• 参考文献17-20
• 第一章 青蒿素与复方磺胺间甲氧嘧啶联合抗鸡球虫疗效试验20-29
• 1 试验材料与方法20-24
• 1.1 试验材料20-22
• 1.2 试验方法22-23
• 1.3 药效判断标准23-24
• 2. 试验结果与分析24-27
• 2.1 临床症状及眼观病变24
• 2.2 各组试验鸡的血便计分24-25
• 2.3 体重变化25
• 2.4 各组鸡抗球虫指数(ACl)25-26
• 2.5 各组试验鸡的免疫器官指数26-27
• 3 讨论27-28
• 参考文献28-29
• 第二章 青篙素与复方磺胺间甲氧嘧啶联合用药对E.tenella致鸡盲肠组织损伤和炎症的影响29-42
• 1 材料与方法29-33
• 1.1 试验药品30
• 1.2 主要仪器30
• 1.3 试验方法30-33
• 2. 试验结果与分析33-37
• 2.1 组织病理学观察33-35
• 2.2 白细胞计数分析35
• 2.3 各组鸡盲肠组织炎性相关因子含量分析35-36
• 2.4 盲肠组织炎性相关基因RT-PCR的特异性检测36-37
• 2.5 各试验组鸡炎性相关因子基因mRNA相对表达量37
• 3 讨论37-40
• 参考文献40-42
• 第三章 青蒿素与复方磺胺间氧嘧啶联合用药对E.tenella第二代裂殖子凋亡,超微结构的影响42-53
• 1 材料与方法42-45
• 1.1 药品与试剂42-43
• 1.2 主要仪器43
• 1.3 方法43-45
• 2 结果45-48
• 2.1 裂殖子的收集45-46
• 2.2 各处理组鸡E tenella第二代裂殖子凋亡比例分析46-47
• 2.3 各处理组鸡E tenella第二代裂殖子线粒体膜电位分析47
• 2.4 各试验组鸡E tenella第二代裂殖子超微结构47-48
• 3 讨论48-51
• 参考文献51-53
• 全文结论53-54
• 致谢54-55

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