宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因检测及耐药性研究

发布时间：2017-08-18 22:29

  本文关键词：宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因检测及耐药性研究

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【摘要】：金黄色葡萄球菌广泛的存在于自然界中,并且是一种对人与动物都有感染性的重要病原微生物。大环内酯类抗生素(Macrolides)是一类含有大环内酯基本化学结构的抗生素,在临床实践中,常常被应用于治疗由革兰氏阳性菌等引起的感染。随着大环内酯类抗生素的使用频率越来越高,由此而产生的耐药菌株也越来越多,导致临床治疗失败。因此,对宁夏地区牛源性的金黄色葡萄球菌进行耐药性调查及毒力基因、耐药基因和生物被膜的检测,不仅对临床合理用药具有指导意义,而且对兽医临床及公共卫生都具有重要意义。本研究主要针对宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌进行试验,首先采集临床及隐性乳房炎乳样,通过革兰氏染色镜检、科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基初筛、双重PCR方法检测16S rDNA和nuc基因进行金黄色葡萄球菌的鉴定,再根据CLSI标准委员会推荐的肉汤微量稀释法,选用18种抗菌药物对所分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行药物敏感性试验。结果显示,共分离鉴定出231株金黄色葡萄球菌,分离率达到16.84%;所分离的菌株对18种抗菌药物呈现出不同程度的耐药,耐药率最高的是氨苄西林,达到79.2%,其次是青霉素(77.9%)、复方新诺明(65.4%),对大环内酯类、林可酰胺类药物的耐药率在40%左右,但对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑林、阿米卡星、多西环素的敏感率较高,对喹诺酮类药物和氨基糖苷类药物的敏感率达60%-89%。所分离的菌株主要以4、5、6、7耐居多,所占比例分别为22.5%、12.1%、11.3%、12.1%,分离菌株最多可耐受的抗菌药物达到16种,多药耐药率达到84.8%。运用PCR扩增技术对231株金黄色葡萄球菌进行毒力基因及大环内酯类耐药基因的检测,结果显示,7种毒力基因hla、hlb、clfa、pvl、sea、seb、sec的检出率分别为99.1%(229/231)、97.8%(226/231)、98.7%(228/231)、2.6%(6/231)、27.7%(64/231)、29.0%(69/231)、5.6%(13/231)。介导主动泵出系统的msrA耐药基因和可使作用靶位发生变化的ermC耐药基因检出率分别为55.3%、67.5%。由此可知,宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌毒力基因主要流行基因型为hla、hlb、clfa。采用双纸片法对31株耐药表型为红霉素耐药且克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌进行诱导耐药性的检测,结果显示,D试验的阳性率为90.3%(28/31)。采用刚果红法对231株金黄色葡萄球菌进行生物被膜形成能力的检测,其中有112株受试菌都具有形成生物被膜的能力,阳性率达到48.5%。综上所述,本研究通过对宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌进行耐药性和毒力基因的研究以及对其生物被膜形成能力的初步检测,揭示了金黄色葡萄球菌在宁夏地区奶牛场的耐药情况和耐药特征,为指导临床合理用药和控制耐药菌的扩散提供理论依据,并为进一步研究细菌的耐药机制打下坚实的基础。
【关键词】：金黄色葡萄球菌 耐药性 毒力基因 大环内酯类耐药基因 生物被膜
【学位授予单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.611
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 缩略词表11-12
• 第一章 文献综述12-22
• 1.1 研究目的和意义12
• 1.2 国内外研究现状12-20
• 1.3 研究内容与方法20-22
• 第二章 金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性调查22-33
• 2.1 试验材料22-25
• 2.2 试验方法25-28
• 2.3 试验结果28-31
• 2.4 分析与讨论31-32
• 2.5 小结32-33
• 第三章 金黄色葡萄球菌的毒力基因检测33-41
• 3.1 试验材料33-34
• 3.2 试验方法34-36
• 3.3 试验结果36-39
• 3.4 分析与讨论39-40
• 3.5 小结40-41
• 第四章 金黄色葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药基因检测及诱导耐药试验41-49
• 4.1 试验材料41-43
• 4.2 试验方法43-44
• 4.3 试验结果44-46
• 4.4 分析与讨论46-48
• 4.5 小结48-49
• 第五章 金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力的检测49-53
• 5.1 试验材料49-50
• 5.2 试验方法50
• 5.3 试验结果50
• 5.4 分析与讨论50-51
• 5.5 小结51-53
• 第六章 结论53-54
• 参考文献54-58
• 附录58-67
• 致谢67-68
• 个人简介68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 高正琴,邢华,李厚达;PCR技术在检测鼠金黄色葡萄球菌中的应用研究[J];中国实验动物学报;2003年01期

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本文编号：697160