A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的临床应用和保护效果评价

发布时间：2017-08-22 18:34

  本文关键词：A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的临床应用和保护效果评价

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【摘要】：产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens),又称魏氏梭菌,存在于很多健康动物的肠道中,当饲养和环境条件改变时,可引起畜禽的的产气荚膜梭菌病,一旦发病,会导致畜禽迅速死亡,病程极短,往往在未得到有效治疗前便死亡。近年来产气荚膜梭菌病已经致使养殖业遭受巨大经济损失。其中A型产气荚膜梭菌是引起家兔腹泻性肠炎的主要致病菌,该菌在肠道内繁殖产生α毒素导致家兔发病。此类病的发病急、死亡率高、发病后用药治疗效果不明显,因此为了有效预防和控制产气荚膜梭菌病的发生,研制高效、安全的类毒素疫苗和评价其效力刻不容缓。ELISA方法,具有特异、敏感、迅速、可以大批量检测抗体的优势,可用于检测和诊断产气荚膜梭菌病,也可应用于疫苗保护效果的评价及流行病学调查。本研究对A型产气荚膜梭菌标准菌种(NCTC528)进行复苏、增菌、产毒,得到以α毒素为主的外毒素溶液。将制备的外毒素通过甲醛灭活,与白油佐剂混合乳化后,成功制备了A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗;另一方面;将外毒素经过过滤除菌,饱和硫酸铵沉淀等方法对外毒素蛋白进行提取。以毒素蛋白作为间接ELISA的包被抗原,摸索优化反应条件,最终建立了产气荚膜梭菌毒素抗体检测的间接ELISA方法。运用该方法对免疫过疫苗的家兔进行抗体水平的连续监测,以此来确定疫苗的最小免疫剂量和合理的免疫程序。疫苗临床保护效果的评价试验:将疫苗分为4个不同的剂量,分别对28日龄和45日龄的家兔各400只首免,28日龄家兔长至45日龄时对家兔进行二免;通过攻毒保护实验和对血清抗体效价的连续监测,结果显示,当家兔血清抗体效价达到6.83×100log2左右时,疫苗对家兔保护效果较好;最终确定了疫苗最小免疫剂量为0.5ml,二免后保护效果更佳。
【关键词】：A型产气荚膜梭菌 类毒素疫苗 间接ELISA 血清抗体
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.4
【目录】：

• 符号说明4-8
• 中文摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-18
• 1.1 产气荚膜梭菌概述11-13
• 1.2 产气荚膜梭菌病在国内外的流行情况及其影响13-15
• 1.3 α毒素的生物学研究15-16
• 1.4 产气荚膜梭菌疾病致病机理及防控措施16-17
• 1.5 研究的进展和意义17-18
• 2 材料和方法18-25
• 2.1 菌种与培养基18
• 2.1.1 A型产气荚膜梭菌种18
• 2.1.2 5%绵羊血琼脂基础平板18
• 2.1.3 硫乙醇酸盐流体培养基FTG增菌液18
• 2.1.4 Gordon汤产毒培养基18
• 2.1.5 PBS的配制18
• 2.2 实验动物18-19
• 2.3 主要仪器及试剂19
• 2.4 主要试剂配制19-20
• 2.5 试验方法20-24
• 2.5.1 菌种复苏20
• 2.5.2 增菌20
• 2.5.3 毒素的制备20-21
• 2.5.4 A型产气荚膜梭菌外毒素的提取21
• 2.5.4.1 外毒素的粗提21
• 2.5.4.2 应用SephadexG-25方法对毒素透析除盐21
• 2.5.5 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE)法检测外毒素中的α毒素21-22
• 2.5.6 外毒素毒力的测定22
• 2.5.7 外毒素对家兔最小致死量的测定22
• 2.5.8 A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备22
• 2.5.9 类毒素疫苗的检测22-23
• 2.5.9.1 稳定性检测22
• 2.5.9.2 甲醛及硫柳汞的检验22-23
• 2.5.9.3 安全性检验23
• 2.5.10间接ELISA检测方法的建立23-24
• 2.5.10.1 包被抗原最佳稀释度确定23
• 2.5.10.2 最佳封闭条件的选择23
• 2.5.10.3 样品最佳反应时间的确定23
• 2.5.10.4 酶标二抗孵育时间的确定23
• 2.5.10.5 显色底物作用时间的选择23
• 2.5.10.6 间接ELISA方法的基本操作程序23-24
• 2.5.11 间接ELISA方法的性能评价24
• 2.5.11.1 特异性实验24
• 2.5.11.2 敏感性实验24
• 2.5.11.3 重复性实验24
• 2.6 间接ELISA方法对疫苗免疫效果的评价24-25
• 2.6.1 免疫实验动物24
• 2.6.2 攻毒保护试验24
• 2.6.3 血清抗体效价的测定24-25
• 3 结果与分析25-35
• 3.1 A型产气荚膜梭菌外毒素的SDS-PAGE检测结果25
• 3.2 A型产气荚膜梭菌外毒素半数致死量测定结果25-26
• 3.3 A型产气荚膜梭菌外毒素对家兔致死量的测定26
• 3.4 外毒素蛋白浓度的确定26
• 3.5 类毒素疫苗的检验26-27
• 3.5.1 稳定性检测26-27
• 3.5.2 甲醛及硫柳汞的检验27
• 3.5.3 安全性检验27
• 3.6 间接ELISA方法最佳反应条件的确立27-29
• 3.6.1 包被抗原最佳稀释度的确定27
• 3.6.2 最佳封闭条件的选择27-28
• 3.6.3 样品最佳反应时间的确定28
• 3.6.4 酶标二抗孵育时间的确定28
• 3.6.5 显色底物作用时间的选择28-29
• 3.6.6 结果判定标准的确定29
• 3.7 间接ELISA方法的性能评价29-30
• 3.7.1 特异性实验29
• 3.7.2 敏感性实验29
• 3.7.3 重复性实验29-30
• 3.8 疫苗保护效果评价结果30-35
• 3.8.1 血清抗体效价测定30-33
• 3.8.2 攻毒保护试验33-35
• 4 讨论35-37
• 4.1 A型产气荚膜梭菌外毒素的制备和提取35
• 4.2 间接ELISA方法的优势35
• 4.3 间接ELISA方法的实际生产应用35-36
• 4.4 血清抗体消长规律和攻毒保护试验结果的研究36-37
• 5 结论37-38
• 参考文献38-42
• 附录42-44
• 致谢44

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1 孙淑莉;徐桐春;张凤莲;;儿童疫苗接种后检测两对半的结果分析[J];石河子科技;2006年06期

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3 王明俊;;谈疫苗接种和免疫的有关问题[J];江西畜牧兽医杂志;1986年01期

4 林建;疫苗——保持你的冷藏环境[J];江西畜牧兽医杂志;2002年03期

5 张转梅;阴君丽;;疫苗接种须避八个误区[J];河南畜牧兽医(综合版);2008年09期

6 ;疫苗接种方面七大新闻[J];广东农业科学;2011年12期

7 景力;丁瑞志;陈良坤;李凯;胡奇伟;;畜禽疫苗安全使用要点[J];中国动物保健;2012年10期

8 郝林生;家禽疫苗接种[J];世界农业;1980年02期

9 叶波;David Shapiro;;禽病疫苗及其接种[J];国外畜牧科技;1983年03期

10 李立;;使猪长得快的疫苗[J];国外畜牧科技;1990年01期

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1 赵根明;袁正安;张涛;顾宝柯;陈健;于淼;蔡华;陈昕;五磐石;;上海市甲型H1N1流感疫苗接种的效果效益评估[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年

2 杨锡强;;疫苗接种的不良反应及其处理[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

3 李明娟;王晓霞;;疫苗报道的困境与出路研究[A];2012年度中国健康传播大会优秀论文集[C];2012年

4 李鑫;滕继军;王军红;张晨;;疫苗接种后面部变异型吉兰-巴雷综合征1例报道[A];山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编[C];2013年

5 吴云红;朱亮;初炜;孔祥金;;基于互联网的动态疫苗监管模式[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

6 万朝敏;;疫苗接种在流感大流行群体防控中的作用[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

7 唐秋艳;林兴兵;刘丽;史楠;曹友声;;疫苗发展现状与挑战[A];科技、工程与经济社会协调发展——河南省第四届青年学术年会论文集（下册）[C];2004年

8 刘柏林;熊亚军;唐有智;唐孝富;;合川区适龄儿童卡介疫苗接种成功率调查分析[A];重庆市预防医学会2012年学术年会论文集[C];2012年

9 陈贤希;陈波;;疫苗药品管理与应用存在的问题及对策[A];2013年中国药学会药事管理专业委员会年会暨“医药安全与科学发展”学术论坛论文集（下册）[C];2013年

10 熊仲祥;;“金苗通”:关注下一代从零开始[A];信息让生活更美好——江苏省通信行业信息化案例选编[C];2010年

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1 本报记者 耿兴敏;“尽快恢复疫苗接种”[N];中国妇女报;2013年

2 伊逸;“疫苗事件”渐行渐远 监管警钟仍须长鸣[N];中国改革报;2005年

3 辛斌;异域旅游 先打疫苗[N];健康报;2002年

4 王乐民;二类疫苗放开会带来什么[N];健康报;2005年

5 姚杰;中国疫苗市场硝烟四起[N];中国经济时报;2003年

6 赵宗祥;别让疫苗成为监管盲点[N];中国医药报;2003年

7 邵建国;全球巨头重金下注疫苗[N];医药经济报;2007年

8 徐李燕;多数二类疫苗都该打[N];农村医药报（汉）;2008年

9 常宾;韩国发明舌下疫苗接种法[N];健康时报;2008年

10 甘卫华邋何松明;接种了疫苗为什么还会感染[N];家庭医生报;2008年

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1 倪德志;新型肿瘤化疗和疫苗制剂的探索性研究[D];中国科学院研究生院(过程工程研究所);2015年

2 邵杰;EV71全病毒灭活疫苗免疫机制的系统生物学研究[D];吉林大学;2016年

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4 李海凤;新型结核病疫苗免疫组分和诊断分子标识候选物的初步筛选及鉴定[D];北京协和医学院;2016年

5 邢泉;靶向防龋DNA疫苗增强粘膜免疫的分子机制研究[D];武汉大学;2010年

6 赫兢;治疗性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

7 许瑾;河北省正定县农村居民对菌痢疫苗接受性及影响因素研究[D];复旦大学;2005年

8 王敏慧;异型M-CSF/M-CSFR DNA疫苗构建及其免疫效应的研究[D];中国协和医科大学;2002年

9 邱志华;病毒样颗粒构建和治疗性降压疫苗的研究[D];华中科技大学;2013年

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4 王丽娟;妊娠女性流感疫苗接种的健康信念调查及结果分析[D];吉林大学;2016年

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9 翟羽佳;眼表滴种靶向DC的纳米DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21治疗复发性HSK的研究[D];东南大学;2016年

10 林晓佳;A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的临床应用和保护效果评价[D];山东农业大学;2016年

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