伏马菌素FB1对人脐静脉血管内皮细胞的毒性作用研究

发布时间：2017-08-23 05:25

  本文关键词：伏马菌素FB1对人脐静脉血管内皮细胞的毒性作用研究

  更多相关文章： 伏马菌素 HUVEC细胞 细胞增殖 细胞周期 线粒体膜电位 细胞凋亡

【摘要】：伏马菌素(Fumonisin,FB)大部分是由串珠镰刀菌(Fusarium Vertieilliodes)和再育镰刀菌(Fusarium Proliferatum)代谢出现的一种水溶性代谢物,是世界上常见的农作物污染物之一。FB1(Fumonisin B1)是伏马菌素主要成分,体内研究证明,有肝毒性、肺水肿、神经毒性和致癌性等症状,体外研究证明,FB1在不同的细胞系中有很强的毒性,本实验以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)为研究材料,采用免疫荧光、流式细胞术、RT-PCR等试验技术,检测不同剂量的FB1体外处理HUVEC不同时间的细胞增殖,细胞活力,细胞周期,氧化应激,细胞分泌,线粒体膜电位,和细胞凋亡和细胞凋亡相关基因表达的变化,试验结果如下:(1)不同浓度(0,5,10和20μg/mL)的FB1处理HUVEC细胞,随着FB1剂量的增加,细胞中LDH含量下调,活性氧含量上调。结果显示,FB1对HUVE细胞毒性作用随剂量的增大而增强,表现为抑制细胞活力。(2)不同浓度(0,5,10和20μg/mL)的FB1处理HUVEC细胞48 h后,随着FB1剂量的增加,细胞核浓缩,细胞周期G0/G1期升高,及线粒体膜电位降低。结果显示,FB1能够诱导HUVEC细胞发生凋亡且各组的凋亡率与毒素呈现出浓度依赖关系,FB1细胞周期是主要阻滞在G_0/G_1期,细胞凋亡可能受线粒体途径的影响。(3)不同浓度(0和10μg/mL)的FB1处理HUVEC细胞48h后,采用RT-PCR方法测定Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2等相关基因表达,结果显示,Caspase-9和Bax基因表达水平升高,Caspase-3基因表达水平有一定程度的升高,Bcl-2基因表达水平有一定的下降,从而诱导HUVEC细胞凋亡。试验结果表明:FB1对HUVEC细胞的毒性作用,表现为抑制细胞增殖,阻碍细胞因子合成以及诱导细胞凋亡。
【关键词】：伏马菌素 HUVEC细胞 细胞增殖 细胞周期 线粒体膜电位 细胞凋亡
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.8
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 前言9-16
• 1.1 伏马菌素的基本性质9-10
• 1.2 伏马菌素的毒性10
• 1.3 伏马菌素的污染情况10-11
• 1.4 伏马菌素的检测方法和预防措施11
• 1.5 细胞凋亡的概念11-14
• 1.5.1 细胞凋亡的生物学特征12
• 1.5.2 细胞凋亡的通路12
• 1.5.3 线粒体通路12-13
• 1.5.4 死亡受体通路13-14
• 1.5.5 内质网的凋亡信号途径14
• 1.6 细胞凋亡的检测14-15
• 1.6.1 形态学观察14
• 1.6.2 线粒体膜电位检测14-15
• 1.6.3 DNA梯形条带分析法15
• 1.6.4 细胞凋亡基因的检测15
• 1.7 研究目的与意义15-16
• 2 材料与方法16-22
• 2.1 细胞株16
• 2.2 主要试剂16
• 2.3 主要仪器16-17
• 2.4 细胞形态、活力和毒性相关检测17-18
• 2.4.1 细胞增殖和形态变化17
• 2.4.2 细胞活力检测17
• 2.4.3 细胞毒性（LDH）的检测17-18
• 2.4.4 ROS的检测18
• 2.5 线绿体膜电位计凋亡相关检测18-22
• 2.5.1 线粒体膜电位的检测18-19
• 2.5.2 Hoechst33342染液检测19
• 2.5.3 细胞周期检测19
• 2.5.4 凋亡相关基因表达的检测19-22
• 2.6 数据分析22
• 3 结果与分析22-31
• 3.1 FB1对HUVEC细胞形态、活力及毒性相关检测结果22-26
• 3.1.1 FB1对HUVEC细胞增殖和形态变化的影响22-23
• 3.1.2 FB1对HUVEC细胞活力的影响23-24
• 3.1.3 FB1对细胞内LDH产生的影响24-25
• 3.1.4 FB1对HUVEC细胞中ROS水平的影响25-26
• 3.2 HUVEC细胞凋亡相关指标的检测26-31
• 3.2.1 线粒体膜电位的检测结果26-27
• 3.2.2 Hoechst33342检测结果27-28
• 3.2.3 FB1对HUVEC细胞周期的影响28-30
• 3.2.4 细胞凋亡相关基因的检测30-31
• 4 讨论31-37
• 4.1 FB1对HUVEC细胞形态、增殖及毒性影响31-33
• 4.2 HUVEC细胞周期的影响33-34
• 4.3 HUVEC细胞线绿体膜电位和凋亡的影响34-37
• 全文总结37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-44

，

本文编号：723249