鸡免疫功能相关MHC B-LβⅡ基因筛选及一定纯度中药复方多糖对其免疫调节作用研究

发布时间：2017-08-26 04:09

  本文关键词：鸡免疫功能相关MHC B-LβⅡ基因筛选及一定纯度中药复方多糖对其免疫调节作用研究

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【摘要】：目的:本研究利用一定纯度的中药复方多糖,作用于MHC B-LβⅡ基因不同基因型的鸡。通过检测鸡不同日龄各项免疫指标,探究一定纯度中药复方多糖对不同基因型鸡的免疫调节作用,确定对不同基因型鸡免疫调节作用的最佳中药复方多糖的浓度,为中药复方多糖在提高鸡免疫能力方面的研究提供理论和试验依据。方法:1、用水提醇沉法,对由当归、党参、熟地、川芎、山楂、何首乌等11味中药组成的中药复方进行粗多糖的提取。2、利用Sevage法除去粗多糖中的蛋白质成分后,将多糖经过AB-8大孔吸附树脂吸附解吸,除去色素及小分子杂质,进行粗多糖纯化;再通过苯酚-硫酸法测定纯化后多糖含量,获得一定纯度的中药复方多糖。3、经过DNA提取技术、PCR-SSCP技术和基因测序技术,对500羽黄麻肉鸡雏鸡进行DNA提取,以及基因分型。4、将一定纯度的中药复方多糖,配制成高剂量(50 mg/mL)、中剂量(25 mg/mL)、低剂量(12.5 mg/mL)3种不同浓度;对不同基因型的鸡,分别进行新城疫疫苗免疫、分组、用药,采集21、42、56、70四个日龄阶段的鸡外周血,分离血清。5、用ELISA方法检测21、42、56、70四个日龄阶段,鸡血清中细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-α、IFN-γ)含量,新城疫抗体含量。6、用ELISA方法检测21、42、56、70四个日龄阶段,鸡血清中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群含量,IgG、IgM含量。7、用MTT法检测21、42、56、70四个日龄阶段,鸡淋巴细胞转化率,红细胞凝集法检测42、56、70三个日龄阶,鸡段绵羊红细胞抗体滴度。结果:1、经过提取纯化后,利用苯酚-硫酸法检测,得到含量为77.10%的中药复方多糖。2、根据PCR-SSCP以及基因测序结果,共分出AA、AB、BB、AC、AD五种不同基因型。3、鸡各项免疫指标检测结果显示,高剂量组中,AA基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体;中剂量组中,AB基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体;低剂量组中,AB基因型个体的各项免疫功能相关指标均高于其他四种基因型个体。结论:分析结果表明,MHC B-LβⅡ基因的多态性对中药复方多糖最适免疫增强剂量的的筛选具有一定程度的影响,不同基因型鸡中药复方多糖的最佳剂量有所不同。同时,在三种不同浓度的中药多糖中,以中剂量浓度的促进作用效果最好。
【关键词】：MHC B-LβⅡ 多糖 细胞因子 免疫球蛋白 细胞转化率 绵羊红细胞抗体滴度
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S853.7;S831
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 英文缩略词表11-12
• 引言12-13
• 第一章 文献综述13-24
• 1 中药多糖的研究进展13-15
• 2 中药多糖在动物免疫调节能力方面研究进展15-23
• 2.1 中药多糖对免疫器官发育的促进作用16-17
• 2.2 中药多糖对T淋巴细胞的免疫促进作用17-19
• 2.3 中药多糖对B淋巴细胞的免疫促进作用19-20
• 2.4 中药多糖对细胞因子的免疫促进作用20-22
• 2.5 中药多糖对鸡新城疫抗体效价(ND)以及绵羊红细胞免疫抗体滴度(SRBC)的影响22
• 2.6 中药多糖对免疫球蛋白的影响22-23
• 3 鸡MHC B-L β基因多态性与免疫性状的关系23-24
• 第二章 中药复方多糖的提取纯化24-28
• 1 材料与方法24-26
• 1.1 试验材料24
• 1.2 试验方法24-26
• 2 结果与分析26
• 2.1 葡萄糖标准曲线的绘制26
• 2.2 中药复方多糖含量的计算26
• 3 讨论26-27
• 4 结论27-28
• 第三章 免疫功能相关MHC B-L β II基因型鸡的多态性分析28-33
• 1 材料与方法28-30
• 1.1 试验材料28-29
• 1.2 试验方法29-30
• 2 结果与分析30-32
• 2.1 PCR-SSCP基因型检测30-31
• 2.2 基因序列结果分析31-32
• 3 讨论32
• 4 结论32-33
• 第四章 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ血清浓度的影响33-41
• 1 材料与方法34-35
• 1.1 试验材料34
• 1.2 试验方法34-35
• 2 结果与分析35-39
• 2.1 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IL-2 含量的影响35-36
• 2.2 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IL-4 含量的影响36
• 2.3 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IL-6 含量的影响36-37
• 2.4 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IFN-γ含量的影响37-38
• 2.5 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡TNF-α含量的影响38-39
• 3 讨论39-40
• 4 结论40-41
• 第五章 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡新城疫抗体效价以及IgG、Ig M血清浓度的影响41-47
• 1 材料与方法41-42
• 1.1 试验材料41-42
• 1.2 试验方法42
• 2 结果与分析42-45
• 2.1 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡ND抗体含量的影响42-43
• 2.2 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡IgG、IgM含量的影响43-45
• 3 讨论45-46
• 4 结论46-47
• 第六章 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡CD4+、CD8+含量，，淋巴细胞转化率以及绵羊红细胞滴度的影响47-54
• 1 材料与方法47-48
• 1.1 试验材料47-48
• 1.2 试验方法48
• 2 结果与分析48-52
• 2.1 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡CD4+含量的影响48-49
• 2.2 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡CD8+含量的影响49-50
• 2.3 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡淋巴细胞转化率的影响50-51
• 2.4 一定纯度中药复方多糖对MHC B-LβⅡ不同基因型鸡SRBC滴度的影响51-52
• 3 讨论52-53
• 4 结论53-54
• 全文结论54
• 创新点54-55
• 参考文献55-62
• 致谢62-63
• 作者简介63-64
• 导师评阅表64

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本文编号：739555