陕西白绒山羊和奶山羊羊口疮病原调查及灭活疫苗免疫效果评估

发布时间：2017-08-31 18:15

  本文关键词：陕西白绒山羊和奶山羊羊口疮病原调查及灭活疫苗免疫效果评估

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【摘要】：羊口疮又称羊传染性脓疱(contagious ecthyma,CE),是由羊传染性脓疱病毒引起的一种人畜共患的急性热性传染性疾病,主要感染山羊等小型反刍动物。该病主要临床表现为山羊唇部等无毛部位皮肤出现丘疹、水泡、脓疱和结痂。在羊口疮流行地区,羊口疮发病率达90%以上,死亡率达10%。榆林市和渭南市分别为陕西省白绒山羊和奶山羊的主要养殖基地,并成为陕西省重点支持的特色产业。近年来这两个地区的羊口疮在多家养殖场屡有发生,但关于这两个地区的羊口疮流行现状我们并不很清楚,这直接影响到对该病防控策略以及措施的制定和实施。本研究分别对陕西省榆林市榆阳区、横山县、神木县和渭南市富平县4个地区进行了羊口疮的分子病原学调查,并用本实验室分离的FX0910株制备羊口疮病毒灭活疫苗,进行安全试验和免疫效果评估。本研究的主要内容及结果如下:1、进行羊口疮病原调查分别采集榆阳区、横山县和神木县外观健康白绒山羊的血样,富平县采集外观健康奶山羊的血样。用NaI法提取血样中病毒DNA,用本实验室建立的PCR检测方法检测样品中的ORF病原。结果显示,榆阳区、横山县、神木县,羊口疮病原总检出率分别为30.0%、29.6%和24.1%,富平县某养殖场羊口疮病原总检出率为82.6%。2、羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果评估以FX0910株作为病毒材料,在犊牛睾丸原代细胞进行扩增,测定病毒滴度,用0.4%甲醛溶液灭活羊口疮病毒液48 h,分别在犊牛睾丸原代细胞和羔羊口唇内部接种灭活病毒,检测灭活效果;灭活的病毒与铝胶盐佐剂按照比例混匀,制成羊口疮病毒灭活疫苗;在羔羊腹股沟划痕接种制备的灭活疫苗,观察羊体反应,检测灭活疫苗的安全性;进行免疫试验,选择预产期为35 d~45 d的孕羊,分两组即免疫组(120只)和空白对照组(80只),颈部皮下注射免疫,免疫剂量为2 mL/只。分别于免疫前和第1次、第2次免疫后的第14 d采集外周血,采用PCR检测外周血中的ORFV,采用中和试验测定外周血中的ORFV中和抗体效价;采集两组新生羔羊的脐带血,采用PCR检测方法对脐带血进行病原检测;统计1月龄以内新生羔羊的羊口疮发病率。结果显示:(1)在犊牛睾丸原代细胞上增殖的羊口疮病毒TCID50为106.8TCID50/100μL;(2)甲醛灭活的病毒不能引起细胞病变,也不能引起羔羊发病,表明FX0910病毒灭活完全;(3)免疫组孕羊免疫前病原检出率为100%,2次免疫后免疫组孕羊血样病原检出率为56.0%,空白对照组免疫前后ORFV检出率分别为90.0%、87.5%;免疫前两组孕羊体内中和抗体效价均为1:2,连续免疫两次后,其中和抗体滴度均明显升高,中和抗体效价达到1:24.02;免疫组脐带血ORFV检出率为14.3%,空白对照组为71.4%;对羔羊连续跟踪1个月,统计其羊口疮发病率,免疫组羔羊全部健康,发病率0%,空白对照组羔羊发病率36.7%。结论:1.摸清了陕北白绒山羊和关中奶山羊主要养殖地区羊口疮的感染现状;2.以羊口疮病毒灭活疫苗免疫孕羊2次,能够显著提高孕羊体内的中和抗体水平,降低孕羊羊口疮感染率,有效阻止羊口疮病毒经胎盘感染胎儿。
【关键词】：羊口疮 羊口疮病毒 流行病学 灭活疫苗 免疫效果评估
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.27
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 文献综述12-15
• 第一章 羊口疮研究进展12-15
• 1.1 病原学研究进展12-13
• 1.1.1 形态结构和基因组特征12-13
• 1.1.2 理化特性13
• 1.1.3 病毒体外培养与增殖特性13
• 1.2 病原性13-14
• 1.3 致病机制14
• 1.4 宿主免疫防御机制14
• 1.5 病毒免疫逃避机制14-15
• 试验研究15-32
• 第二章 羊口疮病原调查15-21
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 主要试剂15
• 2.1.2 实验动物15
• 2.1.3 主要仪器15
• 2.1.4 主要溶液配方15-16
• 2.2 方法16-18
• 2.2.1 样品的采集与处理16-17
• 2.2.2 样品检测17-18
• 2.3 结果与分析18-19
• 2.3.1 样品阳性检测结果18
• 2.3.2 ORFV PCR检测结果18-19
• 2.4 讨论19-20
• 2.5 小结20-21
• 第三章 羊口疮病毒灭活疫苗的制备及免疫效果评估21-32
• 3.1 材料21-22
• 3.1.1 实验动物21
• 3.1.2 羊口疮病毒21
• 3.1.3 主要试剂21
• 3.1.4 主要仪器21
• 3.1.5 主要溶液配方21-22
• 3.2 方法22-26
• 3.2.1 制备和培养原代细胞22-23
• 3.2.2 扩增病毒23
• 3.2.3 测定病毒感染力23-24
• 3.2.4 羊口疮病毒的灭活24
• 3.2.5 羊口疮病毒灭活检测24
• 3.2.6 疫苗佐剂及灭活疫苗的制备24-25
• 3.2.7 动物试验25
• 3.2.8 动物免疫25
• 3.2.9 孕羊抗体测定25-26
• 3.2.10 羊口疮病原检测26
• 3.2.11 羔羊羊口疮发病率统计26
• 3.3 结果与分析26-30
• 3.3.1 羊口疮病毒增殖结果26
• 3.3.2 病毒感染力测定结果26-27
• 3.3.3 ORFV灭活检测结果27-28
• 3.3.4 ORFV灭活疫苗的免疫效果28-30
• 3.4 讨论30-31
• 3.5 小结31-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 致谢37-38
• 作者简介38

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本文编号：767134