训练对蒙古马肌肉发育相关基因MyoG的表达量影响研究

发布时间：2017-09-04 07:28

  本文关键词：训练对蒙古马肌肉发育相关基因MyoG的表达量影响研究

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【摘要】：蒙古马属世界上耐力较强的马,它具有耐劳、抗寒、耐疾病、生命力强等特点,能适应艰苦环境与粗放的饲养管理。蒙古马在我国各个地区都很常见,其主产区是内蒙古自治区和外蒙古。13世纪蒙古军队骑着蒙古马走遍了整个欧亚大陆,正是这样的特殊人为选育方式造就了蒙古马的超强耐力,他们能够在赛场上连续快速奔跑百余公里。这样超强的耐力性状无非由基因和环境决定。因此,为揭示蒙古马超强耐力性状形成的遗传学机理,从基因的角度揭示蒙古马超强耐力性状形成的原理,本研究对6匹遗传背景相似的蒙古马,进行了为期四个月的超负荷运动训练,分别在训练前后采集肌肉样本,对蒙古马骨骼肌转录组进行了测定,寻找与蒙古马耐力相关的调控通路。通过以上步骤发现MyoG基因与肌肉发育有直接相关。随后对MyoG基因进行了表达量验证分析,并对肌肉细胞进行培养、传代,在生长最旺盛的时期提取总RNA。然后采取荧光定量PCR技术对蒙古马训练前后正常肌肉组织和培养传代后的肌肉组织中与肌肉发育相关的MyoG基因进行对比研究,发现该基因在对蒙古马进行长时间的训练后在肌肉组织中的表达量有显著提高,但在训练前将肌细胞进行细胞体外培养后,该基因的表达量无明显的变化,这说明通过训练后MyoG基因的表达上调,促进肌肉的生长,从而使蒙古马的能量来源更加广泛,对耐力性形成有极好的促进作用,而细胞培养传代对基因的表达无明显的影响。
【关键词】：蒙古马 耐力训练 转录组 肌肉发育 基因表达验证
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S821.81
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 缩略词表8-9
• 1 引言9-13
• 1.1 蒙古马的分布及特征9
• 1.2 蒙古马的耐力9-10
• 1.3 运动训练对耐力的作用10
• 1.4 马运动学研究进展10-11
• 1.5 转录组学的研究意义11-13
• 2 本研究的目的意义及技术路线13-14
• 2.1 本研究目的和意义13
• 2.1.1 研究目的13
• 2.1.2 研究意义13
• 2.2 本研究的技术路线13-14
• 3 实验材料与方法14-23
• 3.1 实验材料14-16
• 3.1.1 实验用马及其训练原则14
• 3.1.2 实验样品的采集14
• 3.1.3 实验仪器设备14-15
• 3.1.4 实验试剂材料15-16
• 3.2 实验方法16-23
• 3.2.1 蒙古马骨骼肌细胞的体外培养16-17
• 3.2.1.1 骨骼肌细胞分离及培养16
• 3.2.1.2 骨骼肌细胞纯化16-17
• 3.2.1.3 骨骼肌细胞传代17
• 3.2.1.4 骨骼肌细胞冷冻与复苏17
• 3.2.1.5 骨骼肌细胞鉴定17
• 3.2.2 试剂盒法提取肌肉组织及培养肌细胞总RNA17-18
• 3.2.3 总RNA的质量检测18-20
• 3.2.3.1 检验总RNA的完整性18
• 3.2.3.2 测定总RNA的纯度18
• 3.2.3.3 肌肉转录组高通量测序文库制备与文库测序18-20
• 3.2.3.4 蒙古马训练前后肌肉组织及培养肌细胞总RNA反转录合成cDNA20
• 3.2.4 蒙古马训练前后肌肉发育相关基因的表达量测定20-23
• 3.2.4.1 引物设计20-21
• 3.2.4.2 引物溶解及稀释21
• 3.2.4.3 PCR扩增21
• 3.2.4.4 实时荧光定量PCR体系及条件21-23
• 4 实验结果与分析23-29
• 4.1 蒙古马肌肉细胞体外培养结果23
• 4.2 蒙古马训练前后肌肉及肌肉细胞总RNA的提取结果23-24
• 4.3 训练前后差异表达基因的筛选24-25
• 4.4 训练前后差异基因的Gene Ontology功能富集分析25-26
• 4.5 与肌肉生长相关基因的确定26
• 4.6 蒙古马训练前后正常肌肉组织和肌细胞培养后的MyoG基因的定量验证26-29
• 4.6.1 MyoG和18srRNA基因PCR扩增结果27-28
• 4.6.2 蒙古马训练前后正常细胞和培养传代后MyoG基因的表达差异分析28-29
• 5 讨论29-30
• 6 展望30-31
• 致谢31-32
• 参考文献32-34
• 作者简介34

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本文编号：790156