肾型IBV山西分离株感染雏鸡后细胞因子相对表达量与病理变化的关系

发布时间：2017-09-06 22:07

  本文关键词：肾型IBV山西分离株感染雏鸡后细胞因子相对表达量与病理变化的关系

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【摘要】：目的：对1日龄的雏鸡接种肾型IBV山西分离株,探讨机体炎性因子IFN-γ,IL-4,IL-12,IL-10相对表达量与雏鸡病理损伤程度变化的关系。方法：本试验人工感染1日龄雏鸡。试验组处理,通过滴鼻点眼接种IBV,每只雏鸡接种0.2 mL IBV尿囊液,对照组接种SPF鸡胚的尿囊液。试验组和对照组分开饲养,饮水和饲料完全一样。每天观察雏鸡的精神状态,攻毒2-7 d,14 d,21 d随机抽取两组雏鸡心脏血液,提取血液淋巴细胞mRNA,进行Real-Time PCR测定炎性因子相对表达量;并进行病理学检测和免疫组织化学检测。结果：攻毒后1-3 d,雏鸡精神状态良好,4-5 d出现临床症状,6-7 d临床症状显著,8d以后精神状态好转趋于良好。病理剖检1-3 d无明显的病理变化,4d输尿管肿大,5d出现肾脏出血,肿大。6-7 d肾脏明显地苍白,肿大、肾小管、输尿管内充满尿酸盐,形成典型的“花斑肾”,8d开始恢复正常。病理组织学检查,2d无明显眼观病变,3d肾小球囊壁界限不清,4-5 d肾脏组织出现红细胞,肾小管上皮细胞脱落,6-7d症状更明显,8-21 d病理变化逐渐消失。免疫组化技术：IBV病毒主要侵染肾脏肾小管上皮细胞。对照组无上述病变。细胞因子相对表达量：攻毒后,IFN-γ, IL-4, IL-12在5-7d相对表达量上调并在7d达到峰值后降低;IL-10,5-7d相对表达量上调,但是相比IFN-γ, IL-4, IL-12相对表达量较低。结论：嗜肾型IBV感染鸡早期血淋巴炎性细胞因子IL-4, IL-12, IFN-γ,IL-10mRNA相对表达量的升高可诱导机体的非特异性免疫应答,同时对机体造成严重的肾损伤,出现肾脏苍白,肿大,肾小管上皮细胞变性坏死等病变。
【关键词】：IBV 病理变化 石蜡切片 细胞因子 荧光定量PCR
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：

• 摘要7-8
• 前言8-18
• 1 试验材料18-20
• 1.1 试验动物18
• 1.2 主要仪器及设备18-19
• 1.3 主要试验试剂与耗材19-20
• 1.4 主要试剂的配制20
• 2 试验方法20-28
• 2.1 病毒的增殖培养20-21
• 2.2 实验动物攻毒21
• 2.3 病理切片的制备21-22
• 2.3.1 肾脏组织的固定21
• 2.3.2 肾脏组织脱水及透明21-22
• 2.3.3 肾脏组织浸蜡与包埋22
• 2.3.4 肾脏组织石蜡切片制备及HE染色22
• 2.4 免疫组织化学22-23
• 2.5 鸡血液淋巴细胞的总RNA提取23-24
• 2.5.1 鸡血液淋巴细胞的分离23-24
• 2.5.2 淋巴细胞总RNA提取24
• 2.5.3 mRNA质量检验24
• 2.6 反转录合成第一链cDNA24-25
• 2.7 病毒的检测25-26
• 2.7.1 IBV引物的设计25
• 2.7.2 PCR扩增25-26
• 2.7.3 琼脂糖凝胶电泳检测26
• 2.8 荧光定量PCR检测目的基因26-28
• 2.8.1 引物的设计26-27
• 2.8.2 引物鉴定27
• 2.8.3 RT-PCR反应体系建立27-28
• 3 试验结果28-38
• 3.1 传染性支气管炎病毒(IBV)增殖28
• 3.2 攻毒后雏鸡临床剖检病理变化28-30
• 3.3 组织病理切片观察30-32
• 3.4 免疫组化结果32
• 3.5 血液淋巴细胞分离结果32-33
• 3.6 血液淋巴细胞总mRNA质量鉴定33
• 3.7 血液中IBV的检测33-34
• 3.8 目的基因引物的鉴定34-38
• 3.8.1 Real Time-PCR35-37
• 3.8.2 细胞因子的相对表达量变化37-38
• 4 分析与讨论38-40
• 4.1 本试验选取试验动物的的依据38
• 4.2 组织病理学分析38
• 4.3 石蜡切片对肾脏病理损伤呈现38-39
• 4.4 免疫组化对病原侵袭部位的定位39
• 4.5 RT-PC民护增验证目的基因39
• 4.6 实时荧光定量PCR检测IFN-Y,IL-10,IL-12,IL-4相对表达量的变化39
• 4.7 抗炎细胞因子相对表达量分析39-40
• 5 结论40-41
• 参考文献41-45
• Abstract45-47
• 致谢47

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本文编号：805703