2014-2015年黑龙江三个地区犬细小病毒2型的PCR检测及其VP2基因序列分析

发布时间：2017-09-08 22:28

  本文关键词：2014-2015年黑龙江三个地区犬细小病毒2型的PCR检测及其VP2基因序列分析

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【摘要】：犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)是引起犬腹泻的主要病原,它属于细小病毒科,细小病毒属成员,是一类无囊膜、单股DNA病毒。犬细小病毒病在1978年成为全球性疾病,并在世界各地呈地方性流行。犬细小病毒病为一种烈性传染病,其发病率和死亡率均很高,是目前影响我国宠物犬、观赏犬、军犬、警犬等健康的主要传染病之一,给人们带来了严重经济损失。为了分析黑龙江三个地区CPV-2流行毒株遗传演化的规律及流行现状,本研究以VP2(568 bp)为目的基因,对2014年5月份至2015年4月份黑龙江三个地区有腹泻症状的201份犬粪便拭子样品进行PCR检测。研究结果表明,201份犬粪便拭子样品中有95份样品呈CPV-2阳性,其阳性率为47.26%,且VP2基因的核苷酸和氨基酸的同源性分别为98.8%~100%和97.6%~100%;在这95份CPV-2阳性样品中,新CPV-2a型(Ser297Ala)、新CPV-2b型(Ser297Ala)和CPV-2c型的阳性率分别为64.21%、21.05%和14.74%;各类型阳性率的不同主要体现在地域、季节和年龄之间的差异上;其中CPV-2阳性样品中接受过免疫的犬占48.42%;此外也发现了犬冠状病毒(CCoV)、犬嵴病毒(CaKV)和犬博卡病毒(CBoV)三种病毒混合感染的阳性样品。进化树分析结果显示,新CPV-2a型、新CPV-2b型和CPV-2c型毒株与中国CPV-2毒株关系密切;新CPV-2a型毒株具有较高的变异性,形成三个亚群。95份CPV-2阳性样品中,Tyr324Ile和Thr440Ala的氨基酸替换率分别为100%和64.21%;所有的新CPV-2b型毒株皆在440位发生氨基酸(Thr→Ala)替换,且在CPV-2c型毒株中首次发现370位氨基酸(Gln→Arg)替换的特点。通过本次流行病学调查得出,新CPV-2a型、新CPV-2b型和CPV-2c型在黑龙江三个地区呈混合流行性,其中以新CPV-2a型和新CPV-2b型为主。
【关键词】：CPV-2 VP2基因 PCR 序列分析 流行病学
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 符号说明7-8
• 第一章 文献综述8-18
• 1.1 犬细小病毒病原生物学8-11
• 1.1.1 CPV的形态及理化特性8
• 1.1.2 CPV的基因组结构及编码蛋白8-10
• 1.1.3 VP2各亚型间氨基酸序列差异10-11
• 1.2 犬细小病毒的流行病学11-12
• 1.2.1 CPV的起源与进化11
• 1.2.2 CPV在我国流行现状11-12
• 1.2.3 CPV的感染宿主范围12
• 1.3 犬细小病毒致病机理及临床症状12-13
• 1.3.1 CPV的致病机理12
• 1.3.2 CPV的临床症状12-13
• 1.4 犬细小病毒的诊断技术13-15
• 1.4.1 临床诊断13
• 1.4.2 实验室诊断13-15
• 1.5 犬细小病毒的防治15
• 1.6 本研究的目的与意义15-18
• 第二章 犬细小病毒2型的PCR检测及其VP2基因序列分析18-32
• 2.1 试验材料18
• 2.1.1 主要试剂18
• 2.1.2 仪器设备18
• 2.2 方法18-22
• 2.2.1 样品采集18-19
• 2.2.2 VP2基因扩增与测序19-22
• 2.2.3 进化树构建22
• 2.2.4 其他犬肠道病毒的检测22
• 2.3 结果22-32
• 2.3.1 VP2基因PCR扩增22-23
• 2.3.2 CPV-2 的VP2基因纯化23
• 2.3.3 CPV-2 的阳性测序结果23-28
• 2.3.4 分子进化树分析28-32
• 第三章 讨论32-36
• 第四章 结论36-38
• 参考文献38-48
• 致谢48-50
• 附录50-52
• 个人简历52

【参考文献】

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本文编号：816686