大肠杆菌对奶牛乳腺上皮细胞TGF-β1、bFGF和PDGF表达的影响

发布时间：2017-09-14 15:19

  本文关键词：大肠杆菌对奶牛乳腺上皮细胞TGF-β1、bFGF和PDGF表达的影响

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【摘要】：大肠杆菌是引起奶牛乳腺炎最主要的病原菌,大多引起临床型乳腺炎,严重的引发乳腺纤维化。本实验目的是探讨当大肠杆菌作用于奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)时对TGF-β1、TPR1、bFGF、FGFR2、PDGF和PDGFRβ的表达影响,以及宿主对大肠杆菌的免疫应答过程中是否有TLR2和TLR4的参与,且其作用如何,以便探索奶牛乳腺纤维化的发病机理,为奶牛乳腺纤维化的防治提供指导。本实验采用热灭活大肠杆菌菌液(0.105cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL)作用于体外培养的BMEC,于不同时间点(6h、12h、24h、48h)用荧光定量PCR和Western blot两种方法检测受作细胞TGF-β1、bFGF、PDGF及其受体mRNA及蛋白的表达,同时采用相同方法检测TLR2和TLR4 mRNA及蛋白的表达,采用Western blot方法检测AP-1和NF-κB蛋白的表达情况。研究结果表明：(1)不同浓度的热灭活E.coli作用于BMEC,不同时间点(6h、12h、24h、48h)均可促进TGF-β1、bFGF和PDGF及其受体mRNA和蛋白的表达。TGF-β1、 bFGF和PDGF及其受体的表达水平基本随着时间的延长、浓度的增加而增加,呈时间和浓度依赖性。TGF-β1、TβR1 mRNA表达水平在12h最高,蛋白表达水平在24h最高,106cfu/mL菌液浓度处理组在四个时间点表达水平均最高;bFGF和FGFR2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,24h表达水平最高；PDGF-BB mRNA表达量在12h达到最大,PDGF-BB蛋白表达量在24h达到最大。PDGFRβ蛋白表达水平在12h达到最高。(2)热灭活E.coli作用于BMEC均能促进TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表达。TLR2和TLR4的表达水平基本随时间的延长,浓度的增大而增高。TLR2 mRNA表达水平在12h达到最高,与对照组相比差异极显著(P0.01), TLR2蛋白表达水平在48h达最高,差异显著(P0.05); TLR4mRNA表达水平在24h达到最大。TLR4蛋白表达水平均高于对照组,有统计学意义。(3)热灭活E.coli能促进NF-κB和AP-1蛋白表达,表达水平均高于对照组,基本呈时间和浓度依赖性。NF-κB蛋白表达水平与对照组相比虽不具有统计学意义(P0.05),但均较对照组高,105cfu/mL菌液处理组浓度表达水平最高。AP-1表达水平随着时间的延长,浓度的增大,表达增加,106 cfu/mL浓度表达水平最高,在12h、24h差异极显著(P0.01)。综上所述,热灭活的E.coli可以促进BMEC TGF-β1、bFGF和PDGF三种细胞因子及其受体的mRNA及蛋白的表达,呈一定的时间和浓度依赖性；热灭活E.coli可促进TLR2、TLR4mRNA及蛋白的表达,具有时间和浓度依赖关系；热灭活E.coli促进BMEC NF-κB和AP-1的蛋白的表达,提示E.coli促进BMEC表达促纤维化细胞因子,可能与NF-κB和AP-1信号转导通路的激活有关。
【关键词】：大肠杆菌 BMEC 奶牛乳腺纤维化 TGF-β1 bFGF PDGF TLR2 TLR4 AP-1 NF-κB
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 引言11-19
• 1.1 大肠杆菌对奶牛乳腺的致病性11-15
• 1.1.1 大肠杆菌的病原学12
• 1.1.2 奶牛乳腺对大肠杆菌的先天性免疫反应12-13
• 1.1.3 Toll-like receptor13-14
• 1.1.4 TLRs-NF-κB和TLRs-AP-1信号通路在大肠杆菌感染过程中发挥的作用14-15
• 1.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体生物学特性和在组织器官纤维化中的发挥作用15-17
• 1.2.1 组织器官纤维化的研究15
• 1.2.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体生物学特性和在组织器官纤维化中发挥的作用15-17
• 1.3 研究目的及意义17-19
• 2 实验一 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受体表达的影响19-46
• 2.1 实验材料与方法19-24
• 2.1.1 实验材料19-20
• 2.1.2 实验方法20-24
• 2.1.3 数据分析24
• 2.2 实验结果24-43
• 2.2.1 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TGF-β1/TβR1表达的影响24-31
• 2.2.2 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对bFGF/FGFR2表达的影响31-37
• 2.2.3 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对PDGF-BB/PDGFRβ表达的影响37-43
• 2.3 讨论43-45
• 2.3.1 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TGF-β1/TβR1 mRNA和蛋白表达的影响43
• 2.3.2 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对bFGF/FGFR2 mRNA和蛋白表达的影响43-44
• 2.3.3 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对PDGF-BB/PDGFRβ mRNA和蛋白表达的影响44-45
• 2.4 小结45-46
• 3 实验二 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TLR2、TLR4、NF-κB和AP-1的表达影响46-60
• 3.1 实验材料与方法46-47
• 3.1.1 实验材料46
• 3.1.2 实验方法与内容46-47
• 3.2 实验结果47-58
• 3.2.1 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TLR2表达的影响47-51
• 3.2.2 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TLR4表达的影响51-54
• 3.2.3 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对NF-κB/AP-1蛋白表达的影响54-58
• 3.3 讨论58-59
• 3.3.1 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对TLR2和TLR4表达的影响58
• 3.3.2 热灭活大肠杆菌作用于体外BMEC对NF-κB和AP-1表达的影响58-59
• 3.4 小结59-60
• 4 全文结论60-61
• 致谢61-62
• 参考文献62-69
• 作者简介69

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