玉米赤霉烯酮对断奶仔猪小肠ghrelin、PCNA和Hsp70表达的影响

发布时间：2017-09-15 02:32

  本文关键词：玉米赤霉烯酮对断奶仔猪小肠ghrelin、PCNA和Hsp70表达的影响

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【摘要】：玉米赤霉烯酮(ZEN)是由镰孢属真菌产生的类雌激素毒素,在我国污染广泛,猪对其最为敏感。以往有关ZEN的研究主要关注其对猪生殖系统的影响,鉴于小肠是ZEN重要的代谢场所,本研究通过ghrelin,PCNA和Hsp70三个指标来研究ZEN对小肠的影响。Ghrelin可促进动物对物质的消化吸收,PCNA为细胞增殖的重要衡量指标,Hsp70则是动物机体对抗各种应激因素的重要蛋白。本试验旨在通过检测ZEN对断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠内ghrelin、PCNA和Hsp70蛋白的分布及其mRNA相对表达量,探究ZEN对断奶仔猪小肠的内分泌及消化吸收等生理功能的影响。试验选择28d、平均体重为8.74±0.26 kg健康的三元(杜×长×约)杂交断奶雌性仔猪20头,随机分为两组,对照组10头,处理组10头,所有试验仔猪初始体重差异不显著(P0.05)。对照组饲喂基础饲粮,处理组饲粮中添加1.04 mg/kg ZEN,预试期7d,正试期35d,采集小肠样本。通过HE染色观察小肠的组织结构,免疫组织化学法研究ghrelin、PCNA和Hsp70在小肠中的分布规律,通过qRT-PCR方法,检测ghrelin、PCNA和Hsp70 mRNA的相对表达量。试验结果显示ZEN可导致断奶仔猪小肠组织学结构发生变化,发育受到抑制,十二指肠、空肠、回肠绒毛发育迟缓,其中空肠绒毛长度显著缩短(P0.01),回肠绒毛出现明显的变短、变粗、数量减少,且存在分支不全的现象,回肠粘膜下层内淋巴小结增多。Ghrelin阳性反应在小肠内主要在各段的绒毛上皮,而在小肠腺上阳性反应较弱,添加ZEN后,十二指肠、空肠的阳性反应减弱,累积光密度(IOD)值显著降低(P0.01),但回肠的IOD值增加(P0.01)。PCNA阳性反应主要位于小肠腺细胞和绒毛基底部细胞以及回肠的集合淋巴结内,添加ZEN后,三段小肠PCNA阳性反应降低,IOD结果均显著降低(P0.01)。Hsp70阳性反应在小肠内主要分布在绒毛上皮、小肠腺以及肠壁内的神经元,添加ZEN后三段小肠的阳性反应和IOD值均显著增强(P0.01)。各蛋白mRNA相对表达量的检测结果同免疫组化观察结果基本一致。综上所述,断奶仔猪小肠可通过降低ghrelin的分泌的反应,减弱自身的消化吸收能力,同时小肠通过降低细胞分裂能力,减少小肠对ZEN的吸收,进而抵抗ZEN的毒性作用;而小肠绒毛长度缩短、数量减少和分支发育不完全的变化也是机体抵抗ZEN的生理反应的结果。此外,Hsp70的合成增强,是机体抵抗ZEN对小肠的细胞损伤作用的强有力证据。
【关键词】：玉米赤霉烯酮 断奶仔猪 小肠 ghrelin PCNA Hsp70
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 符号说明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-20
• 1.1 ZEN11-13
• 1.1.1 ZEN的产生与污染现状11
• 1.1.2 ZEN的理化性质和毒性11-13
• 1.1.3 ZEN的吸收与代谢13
• 1.2 Ghrelin13-15
• 1.2.1 Ghrelin的发现与结构13-14
• 1.2.2 Ghrelin的分布14
• 1.2.3 Ghrelin的功能14-15
• 1.3 PCNA15-16
• 1.3.1 PCNA的发现和结构15
• 1.3.2 PCNA的功能15-16
• 1.4 Hsp7016-19
• 1.4.1 Hsp70的发现和概述16
• 1.4.2 Hsp70的功能16-17
• 1.4.3 影响Hsp70表达的因素17-18
• 1.4.4 Hsp70与肠道18-19
• 1.5 小肠结构与功能19-20
• 1.6 本研究的目的和意义20
• 2 材料和方法20-29
• 2.1 试验材料20-24
• 2.1.1 试验动物20
• 2.1.2 饲养管理20
• 2.1.3 试验饲粮20-21
• 2.1.4 样品采集21-22
• 2.1.5 主要试剂和试验用品22-24
• 2.2 试验方法及内容24-26
• 2.2.1 切片制备24-25
• 2.2.2 HE法染色25
• 2.2.3 免疫组化法25-26
• 2.3 qRT-PCR法26-29
• 2.3.1 总RNA的提取26
• 2.3.2 RNA质量的鉴定26
• 2.3.3 引物设计及qRT-PCR扩增26-28
• 2.3.4 数据的统计与分析28-29
• 3 结果及分析29-45
• 3.1 断奶仔猪的生产性能29
• 3.2 断奶仔猪小肠组织学结构29-33
• 3.3 断奶仔猪小肠中ghrelin、PCNA和Hsp70分布规律33-44
• 3.3.1 断奶仔猪小肠中的ghrelin免疫阳性细胞的分布33-37
• 3.3.2 断奶仔猪小肠中的PCNA免疫阳性细胞的分布37-40
• 3.3.3 断奶仔猪小肠中的Hsp70免疫阳性细胞的分布40-44
• 3.4 qRT-PCR试验结果44-45
• 4 讨论45-50
• 4.1 ZEN对断奶仔猪小肠发育的影响45-46
• 4.2 ZEN对断奶仔猪小肠内ghrelin的 影响46-47
• 4.3 ZEN对断奶仔猪小肠内PCNA的影响47-48
• 4.4 ZEN对断奶仔猪小肠内Hsp70的影响48-50
• 5 结论50-51
• 6 参考文献51-60
• 7 致谢60

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本文编号：853805