三种常用IBV商品弱毒疫苗对广西主要流行毒株免疫保护作用的比较研究
本文关键词：三种常用IBV商品弱毒疫苗对广西主要流行毒株免疫保护作用的比较研究
更多相关文章： 鸡传染性支气管炎病毒 商品弱毒疫苗 广西分离株 免疫保护 病毒载量 细胞因子
【摘要】：鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)是目前危害全球养鸡业发展的一种主要疫病,给世界养鸡业造成了严重的损失。疫苗免疫为IB防控主要措施,目前养殖场应用较多的疫苗为H120弱毒苗,近年4/91和LDT3-A弱毒苗使用出现增多趋势。研究表明,目前广西大部分IBV流行株发生了变异,而且绝大多数流行株与目前常用疫苗株血清型不同。为了解目前常用的商品化弱毒疫苗对广西IBV主要流行株的免疫保护作用,为选择正确疫苗进行免疫预防提供参考,本研究选取广西IBV优势血清型Ⅰ、Ⅱ型的代表性分离株GX-YL5、GX-GL11079以及与4/91血清型相同的血清V型的GX-NN09032,对三种常用商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A进行免疫保护作用的评价和比较。三种商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A按照推荐剂量经滴鼻点眼途径对7日龄SPF雏鸡进行免疫,免疫后0、1、2、3周分别应用间接ELISA和流式细胞术检测血清IBV特异性抗体水平和外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量,同时应用实时荧光定量PCR方法对外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA转录水平进行检测。免疫后3周应用广西IBV代表性分离株GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032进行交叉攻毒,攻毒后观察21天,记录各试验组的发病率、死亡率、临床症状和剖检病变,并进行感染率和保护率的统计；同时应用实时荧光定量PCR方法对攻毒后5、14、21天各试验组雏鸡气管冲洗液和肾脏组织中的IBV载量及气管冲洗液中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA转录水平进行检测。ELISA方法检测结果表明,免疫后一周各免疫组开始产生抗体,H120和4/91免疫组在免疫后第二周抗体水平达到峰值,LDT3-A在免疫后第三周抗体水平继续上升。免疫后三周内各免疫组抗体水平与未免疫组比较差异极显著(P0.01)或差异显著(P0.05), LDT3-A免疫组抗体水平显著(P0.05)高于H120和4/91免疫组,H120免疫组抗体水平略高于4/91免疫组,但差异不显著(P0.05)。流式细胞术检测结果表明,免疫后三周内各免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量呈现不同程度的上升趋势,均显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于未免疫组,4/91免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞含量在整体水平上要比LDT3-A免疫组高(P0.05),而LDT3-A免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞含量在整体水平上与H120免疫组相当。应用实时荧光定量PCR方法对外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA转录水平检测结果表明,免疫后三周内,各免疫组外周血中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA转录水平与未免疫组比较均出现不同程度的上调。整体水平上,4/91免疫组IL-1β、IL-6和IL-12的相对表达高于其他两个免疫组,H120免疫组次之,LDT3-A免疫组较低。免疫攻毒结果表明,4/91弱毒苗对三株广西流行毒株的保护率达到75%-83.7%, LDT3-A免疫组为66.7%-75%,而H120免疫组仅为41.7%-58.3%。病毒载量检测结果表明,不同毒株攻毒后各免疫组雏鸡气管冲洗液和肾脏中IBV载量显著(P0.05)或极显著(P0.01)低于未免疫攻毒组,4/91免疫组气管冲洗液和肾脏组织中IBV载量最低,LDT3-A免疫组次之,H120免疫组比较高。另一方面,血清Ⅲ型的H120弱毒疫苗对血清型分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型的GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032广西IBV分离株的免疫保护作用较弱,4/91弱毒疫苗对具有相同血清V型的GX-NN09032有很好的免疫保护作用,对血清Ⅰ、Ⅱ型的GX-YL5、 GX-GL11079的保护作用相对较弱。攻毒后检测结果表明,各免疫组雏鸡气管冲洗液中的IL-1β、IL-6和IL-12 mRNA转录水平在攻毒后5、14天均发生不同程度上调,总体水平上比未免疫攻毒组高,表明各免疫组气管粘膜通过分泌细胞因子,从而发挥细胞因子功能作用进行免疫调节的能力有所增强。综上所述,本课题研究表明,H120、4/91和LDT3-A商品弱毒疫苗均能够有效刺激机体产生不同程度的体液免疫和细胞免疫应答,从而不同程度地抵抗和消除IBV感染,同时能够诱导分泌细胞因子,从而发挥免疫调节作用；4/91商品弱毒疫苗对IBV广西主要流行毒株有较好的临床保护作用和病毒抑制效果,LDT3-A弱毒疫苗的免疫效果和病毒抑制效果较4/91稍低,H120弱毒疫苗的临床保护力和病毒抑制效果欠佳；4/91弱毒疫苗对同一血清型的GX-NN09032分离株具有良好的免疫保护作用。
【关键词】：鸡传染性支气管炎病毒 商品弱毒疫苗 广西分离株 免疫保护 病毒载量 细胞因子
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.31
【目录】：
- 摘要4-7
- ABSTRACT7-14
- 第一章 文献综述14-24
- 1.1 鸡传染性支气管炎病毒的研究进展14-23
- 1.1.1 IBV的生物学特性14-15
- 1.1.2 IBV的致病性15-16
- 1.1.3 感染IBV鸡的临床症状及病理变化16-17
- 1.1.3.1 临床症状16
- 1.1.3.2 病理变化16-17
- 1.1.4 IBV诊断技术与防控技术研究概况17-20
- 1.1.4.1 IBV诊断技术概述17-19
- 1.1.4.2 IBV防控技术19-20
- 1.1.5 IB疫苗的研究进展20-22
- 1.1.5.1 弱毒疫苗20-21
- 1.1.5.2 灭活疫苗21
- 1.1.5.3 基因工程疫苗21-22
- 1.1.6 国内外IBV弱毒疫苗的免疫保护试验的研究情况22-23
- 1.1.6.1 国外IBV弱毒疫苗的免疫保护情况22
- 1.1.6.2 国内IBV弱毒疫苗的免疫保护情况22-23
- 1.2 所选课题的研究目的与意义23-24
- 第二章 三种常用IBV商品弱毒疫苗对广西主要流行毒株免疫保护作用的比较研究24-53
- 2.1 材料24-25
- 2.1.1 疫苗株与分离株24-25
- 2.1.2 试验动物与鸡胚25
- 2.1.3 试验试剂与仪器25
- 2.2 试验方法25-31
- 2.2.1 IBV毒株的增殖25
- 2.2.2 IBV毒株的鉴定25-27
- 2.2.3 鸡胚气管环半数感染量(TOC-ID_(50))的测定27
- 2.2.4 动物试验27-28
- 2.2.5 样品的采集及处理28
- 2.2.6 样品总RNA的提取及反转录28-29
- 2.2.7 免疫鸡外周血血清中IgG抗体水平的检测29-30
- 2.2.8 免疫鸡外周血中特异性T淋巴细胞百分含量的检测30
- 2.2.9 免疫鸡外周血中相关细胞因子mRNA转录水平的检测30-31
- 2.2.10 攻毒后各试验组免疫鸡气管冲洗液和肾脏中病毒载量的检测31
- 2.2.11 攻毒后各试验组免疫鸡气管中相关细胞因子mRNA转录水平的检测31
- 2.2.12 数据处理与分析31
- 2.3 试验结果31-48
- 2.3.1 IBV流行毒株的鉴定结果31-32
- 2.3.2 鸡胚气管环半数感染量(TOC-ID_(50))的测定结果32-33
- 2.3.3 免疫鸡血清中IgG抗体水平33-34
- 2.3.4 免疫鸡外周血中特异性T淋巴细胞百分含量34-37
- 2.3.5 攻毒后各试验组雏鸡临床症状与剖检病变37-40
- 2.3.6 免疫鸡外周血中相关细胞因子mRNA转录水平40-42
- 2.3.7 攻毒后各试验组免疫鸡气管冲洗液和肾脏病毒载量42-45
- 2.3.8 攻毒后各试验组免疫鸡气管中相关细胞因子mRNA转录水平45-48
- 2.4 分析与讨论48-53
- 2.4.1 免疫鸡血清抗体水平与免疫保护力的关系分析48-49
- 2.4.2 免疫鸡外周血中特异性T淋巴细胞百分含量分析49-50
- 2.4.3 不同IBV攻毒后各试验组免疫攻毒保护率的比较分析50-51
- 2.4.4 免疫鸡外周血中和攻毒后免疫鸡气管中相关细胞因子mRNA转录水平分析51-53
- 第三章 结论53-54
- 参考文献54-61
- 致谢61-62
- 个人简历62-63
- 攻读学位期间发表论文情况63
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱兴全，孙学勤，窦兰清，史晓红，牛炳亨;旋毛虫病免疫预防的研究──成虫及肌幼虫排泄分泌抗原对小白鼠的免疫保护作用[J];中国兽医杂志;1994年08期
2 韩雪;刘安军;李研东;;猪软骨多糖与H22鼠肝癌细胞共培养物对小鼠体液免疫保护作用的研究[J];中国饲料;2009年08期
3 刘慧芳;周媛媛;刘思国;宫强;王勇;刘建东;王春来;常月红;迟磊;赵昆;云孟克;;猪传染性胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库的构建及对小鼠的免疫保护作用研究[J];中国预防兽医学报;2008年02期
4 陈萍;冯书章;刘军;孙洋;祝令伟;;EHEC O157 △ler/stx (pBR322::stx1/2B::eae)对小鼠免疫保护作用的实验研究[J];中国预防兽医学报;2007年08期
5 叶丽萍;郝凤奇;王春凤;杨桂连;;口服猪A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌对BALB/c小鼠的免疫保护作用[J];中国兽医学报;2010年07期
6 朱兴全，窦兰清，史晓红，石磊，，牛炳亨;旋毛虫新生幼虫对猪的免疫保护作用[J];中国兽医科技;1995年09期
7 窦兰清,朱兴全,孙学勤,史晓红,王晓华,牛炳亨,杨书军;旋毛虫病免疫预防的研究——肌幼虫可溶性粗抗原对小鼠的免疫保护作用[J];中国兽医科技;1992年03期
8 唐雨德,顾志香,刘玉,郁兴明;猪囊虫病基因工程疫苗的研制[J];动物医学进展;1999年04期
9 温黎俊;王斌斌;;畜禽自家疫苗的应用与优缺点分析[J];中国动物保健;2009年04期
10 韦志敏;兰素群;;畜禽接种疫苗的要点[J];养殖技术顾问;2014年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈洁;陈e
本文编号：862689
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/862689.html
