沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的研制及其应用

发布时间：2017-09-17 16:07

  本文关键词：沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的研制及其应用

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【摘要】：沙丁胺醇是一种人工合成的选择性β-受体激动剂药物,也是治疗平喘类疾病的药物。这种物质非法使用于动物饲养中,可以提高瘦肉率,但是人们食用含有沙丁胺醇含量高的动物组织后,会有头痛、神经过敏、心悸等症状,严重会损伤肝脏,威胁着人们的身体健康。目前,沙丁胺醇的检测标准是色谱法,此方法样品前处理复杂,需要大型仪器和专业人员操作,耗费时间长。胶体金免疫层析技术是一种将胶体金作为标记物免疫学分析技术,应用于食品安全、生物技术、农业科学、人类医学等领域,此技术优点是反应快速、灵敏,操作简单方便,成本低易于工厂化生产。本研究旨在建立一种沙丁胺醇的胶体金免疫层析检测方法。通过采用柠檬酸三钠法制备两种不同粒径的胶体金溶液,将具有沙丁胺醇特异性的金标探针均匀喷在GL0194型的玻璃纤维素膜上,烘干后即为金标垫。经比较试验选用Millipore 135硝酸纤维素膜作为层析膜;控制线(T线)选用1.0 mg/mL的羊抗兔IgG;用浓度为0.6 mg/mL的沙丁胺醇包被抗原(SAL-BSA)喷涂检测线(C线),最后组装成试纸条,并且对试纸条应用于动物组织和饲料样品前处理方法进行单因素优化,选出合适的方案。通过比较两种粒径大小不同的胶体金溶液进行最佳蛋白标记量、最适pH以及金标探针制备的离心条件的确定,进而选择出适合沙丁胺醇的最佳胶体金溶液是在100 mL的0.01%胶体金溶液中添加1%柠檬酸三钠的量为1.8 mL所对应的胶体金粒径;通过紫外-可见光分析和外观观察试验确定了金标探针的最佳蛋白标记量为6μg/mL,最适pH为0.2mol/L碳酸钾的加入量为8μL/mL;金标复溶液的配方为0.01 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液加10%蔗糖、0.5%PEG、1%BSA和0.1%Na Cl,稀释倍数为6倍;样品垫的处理液配方为0.01 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液加1%的蔗糖和1%的吐温-20。样品前处理方案为动物组织采用的前处理方法是5%三氯乙酸水解和超声提取结合的方式,饲料采用的是0.2mol/L磷酸-甲醇(V:V,4:1)和超声提取结合的方法。单因素优化的结果为:样品用量为2g,提取液体积为4 mL,超声时间为8 min,离心时间为5 min。用制备好的免疫层析试纸条检测沙丁胺醇标准品与已知含量的沙丁胺醇的动物组织和饲料,检测限分别为3μg/L、10μg/kg和12μg/kg,在其检测限范围内重现性为100%,没有假阳性及假阴性出现。对制备的沙丁胺醇试纸条的验证试验表明,该试纸条稳定性良好,对沙丁胺醇的特异性强,可以很好地应用于动物组织和饲料样品的实际检测。
【关键词】：沙丁胺醇 胶体金 免疫层析试纸条 动物组织 饲料
【学位授予单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.84;S816.17
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 主要符号表11-12
• 第1章 引言12-24
• 1.1 沙丁胺醇概述12-14
• 1.1.1 沙丁胺醇的理化性质12
• 1.1.2 沙丁胺醇的药理作用12-13
• 1.1.3 沙丁胺醇的营养再分配作用13
• 1.1.4 沙丁胺醇的毒性作用13
• 1.1.5 沙丁胺醇的国内外应用现状13-14
• 1.2 沙丁胺醇的代谢规律14
• 1.2.1 沙丁胺醇的吸收代谢规律14
• 1.2.2 沙丁胺醇在动物体内残留的消除规律14
• 1.3 沙丁胺醇的国内外检测标准14-17
• 1.3.1 国内标准14-17
• 1.3.2 国外标准17
• 1.4 沙丁胺醇残留检测方法17-20
• 1.4.1 感官检测法17-18
• 1.4.2 液相色谱法18
• 1.4.3 气相色谱法18
• 1.4.4 免疫分析法(IA)18-19
• 1.4.5 毛细管电泳法（CE）19
• 1.4.6 荧光光度法和电化学免疫法19-20
• 1.5 胶体金免疫层析技术的研究现状20-23
• 1.5.1 胶体金免疫层析及其原理20
• 1.5.2 胶体金免疫层析的特点20-21
• 1.5.3 胶体金免疫层析技术在食品安全检测中的应用21-22
• 1.5.4 胶体金免疫层析技术的发展趋势及展望22-23
• 1.6 论文研究目的与研究内容23-24
• 1.6.1 研究目的23
• 1.6.2 研究内容23-24
• 第2章 沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的研制24-49
• 2.1 试验材料24-25
• 2.1.1 主要药品试剂24-25
• 2.1.2 主要仪器和设备25
• 2.1.3 主要试验耗材25
• 2.2 试验方法25-32
• 2.2.1 胶体金溶液的制备25-26
• 2.2.2 胶体金溶液质量的鉴定26
• 2.2.3 金标探针的制备26-28
• 2.2.4 金标探针的鉴定及分析28-29
• 2.2.5 样品垫的制备29
• 2.2.6 金标垫的制备29-30
• 2.2.7 NC膜划线30
• 2.2.8 试纸条的组装与结果判断30-31
• 2.2.9 试纸条的性能测定及评价31-32
• 2.3 试验结果32-46
• 2.3.1 胶体金溶液的制备及其质量鉴定32-33
• 2.3.2 金标探针的制备33-36
• 2.3.3 金标探针的鉴定与分析36-38
• 2.3.4 样品垫的选择与处理38-39
• 2.3.5 金标垫的选择与制备39-41
• 2.3.6 NC膜划线41-43
• 2.3.7 试纸条性能测试43-46
• 2.4 讨论46-47
• 2.4.1 胶体金溶液的制备46
• 2.4.2 金标探针的制备46-47
• 2.4.3 试纸条的组装材料47
• 2.4.4 环境的温度、湿度47
• 2.5 本章小结47-49
• 2.5.1 胶体金溶液的制备、鉴定及选择47-48
• 2.5.2 金标探针的鉴定48
• 2.5.3 试纸条的组装48
• 2.5.4 试纸条性能测试48-49
• 第3章 沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的应用49-63
• 3.1 试验材料49-50
• 3.1.1 主要试剂与材料49-50
• 3.1.2 主要仪器设备50
• 3.2 胶体金免疫层析试纸条样品的前处理方法选择50-52
• 3.2.1 新鲜动物组织的样品前处理50-51
• 3.2.2 饲料的样品前处理51-52
• 3.3 样品前处理方法的优化52-53
• 3.3.1 样品用量m的选择52
• 3.3.2 提取液体积V的选择52
• 3.3.3 超声提取时间t_1的选择52
• 3.3.4 离心时间t_2的选择52-53
• 3.4 高效液相色谱法串联质谱法检测动物组织和饲料中的沙丁胺醇53
• 3.4.1 新鲜动物组织和饲料的样品前处理53
• 3.4.2 高效液相色谱串联质谱的测定条件53
• 3.5 样品前处理方法的选择结果53-56
• 3.5.1 新鲜动物组织的样品前处理53-55
• 3.5.2 饲料的样品前处理55-56
• 3.6 样品前处理方法的优化结果56-60
• 3.6.1 样品用量m的选择56-57
• 3.6.2 提取液体积V的选择57-58
• 3.6.3 超声时间t_1的选择58
• 3.6.4 离心时间t_2的选择58-59
• 3.6.5 样品检测限结果59-60
• 3.7 沙丁胺醇胶体金免疫层试纸条与HPLC-MS的相关性60-62
• 3.7.1 HPLC-MS方法的结果60-61
• 3.7.2 沙丁胺醇试纸条和HPLC-MS的相关性61-62
• 3.8 讨论62
• 3.9 本章小结62-63
• 3.9.1 胶体金免疫层析试纸条样品的前处理方法选择62
• 3.9.2 样品前处理方法的优化及检测限62-63
• 第4章 结论与展望63-65
• 4.1 结论63-64
• 4.1.1 沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的制备63-64
• 4.1.2 沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的应用64
• 4.2 展望64-65
• 致谢65-66
• 参考文献66-72

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本文编号：870362