猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

发布时间：2017-09-21 10:38

  本文关键词：猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

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【摘要】：以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0μg/mL和1∶200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37℃1h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1∶10 000和37℃45min;阴性临界值判断标准为当D450nm0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。
【作者单位】： 新乡市动物疫病预防控制中心;新乡学院生物技术研究中心;
【关键词】： 猪瘟病毒 E蛋白 间接ELISA 抗体检测
【基金】：河南省基础与前沿技术研究(122300410003) 国家自然科学基金(31201877) 新乡学院博士科研启动经费(1399020164) 河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230837)
【分类号】：S852.4
【正文快照】： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性传染病[1]。病毒基因组为12.3kb的单股正链线性RNA,包含1个开放性阅读框架(ORF),编码1个由3 898个氨基酸组成的多聚蛋白,包括4个结构蛋白(C、E0、E1、E2)和8个

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1 邱昌庆,周继章,高双娣,程淑敏;卫可和泛福露益消毒剂抗猪瘟病毒试验[J];中国兽医科技;2003年03期

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9 和彦良;李真光;冷雪;徐晓琴;武华;;猪瘟病毒感染后对机体免疫系统的影响[J];中国畜牧兽医;2011年12期

10 岳铃;蒋大良;聂福平;鲍晓伟;李乙江;王志慧;黄微;王意银;范泉水;肖啸;余兴龙;李作生;;猪瘟病毒单克隆抗体制备及病毒荧光检测研究[J];上海畜牧兽医通讯;2012年04期

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1 陈国开;李婉艳;金纬虎;李春玲;臧莹安;;几种新型消毒剂抗猪瘟病毒兔体试验[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年

2 聂玉春;王镇;周海霞;邓宏魁;丁明孝;;猪瘟病毒的形态结构及侵染机理的研究[A];第十二届全国电子显微学会议论文集[C];2002年

3 李卫;李树春;;应用弗氏佐剂制备猪瘟病毒抗原免疫家兔获取高效价抗体的试验[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年

4 李学伍;张改平;;猪瘟病毒生物学特性的研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年

5 颜晓冬;诸葛增玉;翁小刚;张■;鱼文媛;王九峰;;猪瘟病毒对猪外周血单个核细胞产生细胞因子影响的研究[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年

6 李卫;李树春;;应用弗氏佐剂制备猪瘟病毒抗原免疫家兔获取高效价抗体的试验[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

7 郭焕成;席进;涂长春;;猪瘟病毒基因分型寡核苷酸芯片方法的建立[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

8 谢志勤;谢芝勋;廖敏;邓显文;庞耀珊;刘加波;唐小飞;何竞铭;;反转录聚合酶链反应检测猪瘟病毒方法的建立与应用[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

9 涂长春;;中国猪瘟病毒分子流行病学研究进展[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年

10 郭焕成;席进;涂长春;;猪瘟病毒基因分型寡核苷酸芯片方法的建立[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

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1 中国兽药监察所 副研究员 王琴;猪瘟病毒E2基因的研究进展及其应用[N];中国畜牧水产报;2000年

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