救必应总黄酮的提取及其对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用机理研究

发布时间：2017-10-01 02:22

  本文关键词：救必应总黄酮的提取及其对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用机理研究

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【摘要】：本文主要采用响应面积法优化救必应总黄酮的超声辅助提取工艺；采用二倍微量稀释法、菌落计数法来测定救必应黄酮类化合物及抗菌药物的MIC及黄酮类化合物对产ESBLs大肠杆菌生长曲线的影响；采用微量棋盘法、联合传代法来测定黄酮类化合物联合抗菌药物后的抑菌效果；主要通过透射电镜(TEM)、测定AKP活性、可溶性蛋白浓度、总蛋白合成量及DNA的荧光强度来研究救必应黄酮类化合物对产ESBLs大肠杆菌的抑菌机理。主要结果如下：1.在单因素试验结果的基础上,采用响应面积法优化超声辅助提取救必应总黄酮的最优工艺为：乙醇浓度60%,液料比40：1(mL/g),超声功率60%(420W),超声温度55℃的条件下提取40 min。2.该菌株经鉴定为产ESBLs大肠杆菌,其对头孢曲松、头孢他啶、头孢噻呋、头孢噻肟、阿莫西林、磷霉素、林可霉素、阿米卡星、阿奇霉素、乙酰甲喹、氟苯尼考抗菌药物耐药,但对美罗培南、粘杆菌素敏感；救必应总黄酮粗提物可明显抑制大肠杆菌的生长并随着浓度的提高表现出明显的抑菌杀菌作用；救必应总黄酮粗提物与头孢曲松、头孢他啶、头孢噻呋、头孢噻肟、阿莫西林、磷霉素、阿米卡星、氟苯尼考、阿奇霉素联合作用后的均为0FICI0.5,表现为协同作用；与林可霉素、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶联合作用后的均为0.5FICI1,表现为相加作用。3.救必应总黄酮粗提物对产ESBLs大肠杆菌的抑菌机理结果如下：TEM图像表明救必应总黄酮粗提物可明显破坏大肠杆菌细胞壁、细胞膜结构；可使培养基中AKP活性、胞外可溶性蛋白含量增多进一步表明其对细胞壁、细胞膜的破坏作用；可抑制或消除大肠杆菌总蛋白的合成,可抑制DNA的合成。
【关键词】：救必应 总黄酮 ESBLs 大肠杆菌 抑菌机理
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S853.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 符号缩写11-12
• 第一章 文献综述12-19
• 1.1 救必应的药理作用研究12-14
• 1.1.1 体外抑菌及抗炎镇痛作用研究12-13
• 1.1.2 对心血管的作用13
• 1.1.3 降血脂作用13-14
• 1.1.4 抗肿瘤作用14
• 1.1.5 保肝作用14
• 1.2 中药黄酮类化合物的抗菌作用研究14-17
• 1.2.1 直接抑菌作用15
• 1.2.2 协同抗菌药物抑菌作用15-16
• 1.2.3 抑制细菌的致病性16-17
• 1.3 超广谱β-内酰胺酶的研究17-19
• 1.3.1 超广谱β-内酰胺酶的类型17-18
• 1.3.2 产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌18-19
• 第二章 响应面法优化救必应总黄酮的提取工艺19-33
• 2.1 材料与仪器19-20
• 2.2 实验方法20-22
• 2.2.1 救必应总黄酮含量的测定原理20
• 2.2.2 对照品溶液的制备及波长的选择20-21
• 2.2.3 标准曲线的绘制21
• 2.2.4 救必应总黄酮的测定及计算方法21-22
• 2.3 试验设计22
• 2.3.1 超声辅助提取救必应中总黄酮的单因素实验22
• 2.3.2 响应面法优化救必应总黄酮的提取条件22
• 2.4 结果与分析22-31
• 2.4.1 单因素的实验结果与分析22-26
• 2.4.2 救必应总黄酮提取工艺优化的实验结果与分析26-31
• 2.5 讨论与小结31-33
• 2.5.1 讨论31-32
• 2.5.2 小结32-33
• 第三章 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用效果33-49
• 3.1 产ESBLs大肠杆菌的分离及鉴定33-40
• 3.1.1 实验材料33-35
• 3.1.2 实验方法35-37
• 3.1.3 结果与分析37-40
• 3.2 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的抑菌作用40-48
• 3.2.1 实验材料40
• 3.2.2 实验方法40-43
• 3.2.3 结果与分析43-48
• 3.3 讨论与小结48-49
• 3.3.1 讨论48
• 3.3.2 小结48-49
• 第四章 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的抑菌机理的研究49-61
• 4.1 实验材料49-50
• 4.1.1 仪器49-50
• 4.1.2 试剂50
• 4.2 实验方法50-55
• 4.2.1 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的超微结构的影响50-51
• 4.2.2 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的细胞壁通透性的影响51
• 4.2.3 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的胞外可溶性蛋白的影响51-52
• 4.2.4 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的菌体总蛋白合成的影响52-54
• 4.2.5 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的DNA合成的影响54-55
• 4.3 结果与分析55-60
• 4.3.1 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的超微结构的影响55-56
• 4.3.2 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的细胞壁通透性的影响56-58
• 4.3.3 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的胞外可溶性蛋白的影响58-59
• 4.3.4 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的菌体总蛋白合成的影响59
• 4.3.5 救必应总黄酮对产ESBLs大肠杆菌的菌体DNA合成的影响59-60
• 4.4 讨论与小结60-61
• 第五章 结论61-62
• 参考文献62-72
• 致谢72-73
• 攻读学位期间发表的学术论文73

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本文编号：951795